Genetically capsid-modified adenovirus vectors as nanoparticle vaccines

在DEM geants en Projekt Sollen im Friend-RetroVirus-(FV-)MODELL抗逆转录病毒Vak-zinierungsstrategien mittels Vak-zinierungsstrategien mittels Vak-zinierungsstrategien Mmittels Adv-Vektoren(ADV)中，也出现了Ad5-Kapsidoberfläche在Einem Replativen阵列中的应用。DAS FV是一种免疫抑制逆转录病毒，在DEM复制的作用下，病原脾病灶形成病毒(SFFV)复制Sowie DEM复制，而不是病原HelferVirus Friend小鼠白血病病毒(F-MuLV)。在允许的Mäusen kommt es be inefktion Mit Fv zur Entwickump einer Erythroleukämie and Splenomegalie.Um die Oberflächenkomponente des F-MuLV-HüllProteins(Envgp70)auf der Ad5-Kapsidoberfläche zu Präseneren，Fusionierten wir Envgp70 an den C-Terminus des Ad5-KapsidProteins Pix.Wir Generierten Adv，Das FusionsProtein Pix-Envgp70 Kodieren and Somit Envgp70 auf DEM Kapsid Präsentieren(手套Western Blot-分析BESTätigt)。Wir konnten zeigen，dass die prevenlaktische Prime-Boost-Vakzinierung von FV-Permitven von CB6F1-Hybrimäusen MIT Ad5-Vektoren die pix-Envgp70 und F-MuLV-gag kodieren zu einer标志着niedrigeren Viruslast and geringeren Milzgrönach Invenöser FV-Belastungsinfektion füHRTE ALS in der Kontrollgruppe die MIT F-MuLV-Env-und-gag-kodierenden ADV vakziniert Wurden。在CD4+和CD8+T细胞中，γ-干扰素的产生具有重要意义。UM DEN Efluss Ad5-中立方Antikörper zu mindern verwendten wir für die Boost-Vakzinierung Vektoren MIT DEM光纤-竖轴/-Knob von Ad35。Das primäre Ziel des geants en Projektes ist den zugrunde liegenden Machismus für den annesserten抗逆转录病毒免疫系统和Ad5-Basierenden Nanopartikel-Vakzine im FV-MODELL zu unteruchen。因此，Sollen U.A.die Rolle der Präsentation von Envgp70 auf Dem Adv-Kapsid，die Kreuzpräsentation des auf Dem Kapsid Präsenerten抗原Dendritische Zellen(DC)和De Schützenden免疫力Effektor-Machisman Charakterisiert被选中。这是一项新的计划，从战略上讲，从现在开始，我们将继续努力。我们从东方东方的三个单体中找到了有效的三聚体，并对环境进行了研究。1.基因融合von Envgp70和N-末端Ad5-KapsidProteins PIIIa。2.Genetische Fusion Jeweils eines Covalys Protein-TAG an den C-末端von pix und Envgp70 und Kovalente Bindung MIT Lifeeines Crosslinker-Moleküls。他说：“这是一件非常重要的事情。”DES Weiteren Sollen Envgp70 zusamman MIT der Ektodonäne des TransmProteins Envp15E auf DEM Adv-Kapsid Präsentiert Wen.Abschlieüend soll，im Sinne eines“Proof-ciple”，Unteruchht der Effekt der Ad5 Nanopartikel-Vakzine Veressert Wen den kann，wenn die Transduktion von DC dch die die Inkorporation eines Single-Chain-Antikörpers Spezifisch gegen DC-Sign(CD209)in das ADV-Kapsid gesteigert Well den kann。从L的角度来看，这是一件非常重要的事情，因为这是一件非常重要的事情。

In dem geplanten Projekt sollen im Friend-Retrovirus- (FV-) Modell antiretrovirale Vak-zinierungsstrategien mittels Adenovirus-Vektoren (AdV), die das Impfantigen sowohl kodieren als auch auf der Ad5-Kapsidoberfläche in einem repetitiven Array präsentieren, untersucht werden. Das FV ist ein immunsuppressiver retroviraler Komplex, der aus dem replikationsdefekten, pathogenen Spleen Focus Forming Virus (SFFV) sowie dem replikationskompetenten, nicht-pathogenen Helfervirus Friend Murine Leukemia Virus (F-MuLV) besteht. In permissiven Mäusen kommt es bei Infektion mit FV zur Entwicklung einer Erythroleukämie und Splenomegalie. Um die Oberflächenkomponente des F-MuLV-Hüllproteins (Envgp70) auf der Ad5-Kapsidoberfläche zu präsentieren, fusionierten wir Envgp70 an den C-Terminus des Ad5-Kapsidproteins pIX. Wir generierten AdV, die das Fusionsprotein pIX-Envgp70 kodieren und somit Envgp70 auf dem Kapsid präsentieren (mittels Western Blot-Analyse bestätigt). Wir konnten zeigen, dass die prophylaktische Prime-Boost-Vakzinierung von FV-permissiven CB6F1-Hybridmäusen mit Ad5-Vektoren die pIX-Envgp70 und F-MuLV-Gag kodieren zu einer signifikant niedrigeren Viruslast und geringeren Milzgröße nach intravenöser FV-Belastungsinfektion führte als in der Kontrollgruppe die mit F-MuLV-Env- und -Gag-kodierenden AdV vakziniert wurden. Der verbesserte Impfschutz korrelierte mit signifikant höheren F-MuLV-neutralisierende Antikörper-Titern und vermehrter Interferon-γ-Produktion in CD4+ und CD8+ T-Zellen. Um den Einfluss Ad5-neutralisierender Antikörper zu mindern verwendeten wir für die Boost-Vakzinierung Vektoren mit dem Fiber-Shaft/-Knob von Ad35. Das primäre Ziel des geplanten Projektes ist den zugrunde liegenden Mechanismus für den verbesserten antiretroviralen Immunschutz der Ad5-basierenden Nanopartikel-Vakzine im FV-Modell zu untersuchen. So sollen u.a. die Rolle der Präsentation von Envgp70 auf dem AdV-Kapsid, die Kreuzpräsentation (cross-presentation) des auf dem Kapsid präsentierten Antigens durch dendritische Zellen (DC) und die schützenden Immuneffektor-Mechanismen charakterisiert werden. Das sekundäre Ziel des geplanten Projektes ist es, Strategien zu untersuchen, um die Ad5-Nanopartikel-Vakzine weiter zu verbessern. Erstens soll untersucht werden, ob durch eine Präsentation von Envgp70 auf dem AdV-Kapsid in nativer Orientierung als Monomer oder Trimer die Effizienz der Vakzine gesteigert werden kann. Hierzu sollen zwei Strategien untersucht werden: 1. Genetische Fusion von Envgp70 an den N-Terminus des Ad5-Kapsidproteins pIIIa. 2. Genetische Fusion jeweils eines Covalys Protein-Tags an den C-terminus von pIX und Envgp70 und kovalente Bindung mit Hilfe eines Crosslinker-Moleküls. Zweitens soll untersucht werden, ob die Präsentation von Gag auf dem AdV-Kapsid den Immunschutz verbessert. Des Weiteren sollen Envgp70 zusammen mit der Ektodomäne des Transmembranproteins Envp15E auf dem AdV-Kapsid präsentiert werden. Abschließend soll, im Sinne eines „proof of prin-ciple“, untersucht werden ob der Effekt der Ad5 Nanopartikel-Vakzine verbessert werden kann, wenn die Transduktion von DCs durch die Inkorporation eines single-chain-Antikörpers spezifisch gegen DC-SIGN (CD209) in das AdV-Kapsid gesteigert werden kann. Der derzeitige Stand der Arbeiten lässt einen Beitrag für die Herstellung wirksamerer Vektor-basierender Split-Vakzine gegen persistierende virale Infektionen oder Tumore erwarten.