Mechanism for effects of of ketone diet feeding on changes in skeletal muscles induced by excercise

ケトン餌による骨格筋の遅筋化にSama3aが関与しているのかを明らかにすることを目的として、Sema3a floxマウスとACTA1 -Creマウスを掛け合わせて、骨格筋特異的にタモキシフェンでSama3aがknockoutされるマウスを作成することを試みた。しかし、Sama3aがknockoutされた筋繊維とそうでないものが混在する、つまり、キメラのほうが解析に有利と考え、AAVでCreを発現させることにした。こうすることによりAAVを発現した筋繊維ではSema3aがknockoutされ、発現していない筋繊維ではSama3aが機能している。したがって本年度は、１）骨格筋に発現するAAVベクターの探索、２）筋繊維タイプの解析、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。その結果、１）MyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40の作成、２）前脛骨筋（Tibialis anterior: TA）、長趾伸筋（Extensor digitorum longus: EDL），腓腹筋（Gastrocnemius: GC），ヒラメ筋（Soleus: SOL）を摘出する方法を確立し、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、laminin、Sema3aの３重蛍光免疫染色の最適化、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。

ケトン餌による骨格筋の遅筋化にSama3aが関与しているのかを明らかにすることを目的として、Sema3a floxマウスとACTA1 -Creマウスを掛け合わせて、骨格筋特異的にタモキシフェンでSama3aがknockoutされるマウスを作成することを試みた。しかし、Sama3aがknockoutされた筋繊維とそうでないものが混在する、つまり、キメラのほうが解析に有利と考え、AAVでCreを発現させることにした。こうすることによりAAVを発現した筋繊維ではSema3aがknockoutされ、発現していない筋繊維ではSama3aが機能している。したがって本年度は、１）骨格筋に発現するAAVベクターの探索、２）筋繊維タイプの解析、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。その結果、１）MyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40の作成、２）前脛骨筋（Tibialis anterior: TA）、長趾伸筋（Extensor digitorum longus: EDL），腓腹筋（Gastrocnemius: GC），ヒラメ筋（Soleus: SOL）を摘出する方法を確立し、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、laminin、Sema3aの３重蛍光免疫染色の最適化、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。