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ブタキメラ技術を基盤とした移植・再生医療に関する研究

基于猪嵌合体技术的移植与再生医学研究

基本信息

批准号：
13J06509
负责人：
中野和明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Meiji University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、(1) ブタiPS細胞の多分化能（キメラ形成能）の検証、(2) 初期発生過程における異種キメラの可能性の検証、(3) 腎臓欠損ブタの作出、を主たる課題とした。1年次には、ブタ単為発生胚を用いるキメラ胎仔作出法を開発し (Nakano et al., PLoS ONE, 2013)、ブタiPS細胞の多能性評価 (Arai et al., Genesis, 2013)を行った (課題1)。課題2に関しては、ブタ胚と異種胚細胞とによるキメラ胚の作製条件を検討した。これを受けて2年次には、異種間キメラ胎仔の作出に取り組んだ。加えて、腎臓欠損の表現型を示す、遺伝子ノックアウト (KO)ブタの作出に取り組んだ。課題2については、ブタ胚をホストとし、マウス、マーモセット胚細胞 (内部細胞塊：ICM)をドナー細胞とする、異種間キメラ胚の体内発達能と、胎仔期（体節期：胎齢20-23）におけるキメリズムについて検証した。異種間キメラ胚を借腹雌に移植し、得られた胎仔組織にドナー細胞の寄与が認められた。マウスあるいはマーモセットICMをドナー細胞とするブタ異種間キメラ胚は、体節期胎仔において、キメラ状態を維持できることを明らかとした。課題3では、ZFNを用いたゲノム編集によりSall1遺伝子をKOしたブタにおける、腎臓形成を解析した。Sall1 KO細胞を核ドナーとして作製した体細胞核移植胚から得られたクローンブタでは、腎臓形成がほぼ完全に欠落していた。さらに、痕跡的な腎組織の解析によって、Sall1遺伝子の発現消失が確認された。以上から、Sall1遺伝子をKOすることでブタにおいても腎臓欠損の表現型を誘導し得ることが明らかとなった。本研究の成果は、臓器再生の実現に向けた今後の研究に重要な基礎的知見と技術的基盤を提供すると考えられる。

This study is aimed at: (1) identification of the pluridifferentiation ability of iPS cells;(2) identification of the possibility of heterodifferentiation during early development; and (3) identification of the formation and development of renal failure. 1 year later, the method of embryo formation was developed (Nakano et al., PLoS ONE, 2013), Evaluation of pluripotency of PS cells (Arai et al., Genesis, 2013). The second task is to discuss the conditions for the production of embryos. This is the second time that we've had sex. We've had sex. The expression of kidney failure and the selection of kidney failure phenotype are also discussed. Subject 2: In vivo development of embryo cells (internal cell mass: ICM), in vivo development of embryo cells, in vivo development of embryo cells, in fetal stage (somite stage: fetal 20-23), in vitro development of embryo cells. The embryo was transplanted into the abdomen and the fetal tissue was obtained. The embryo is in the middle of the somite stage, and the embryo is in the middle of the somite stage. Question 3: How to analyze the formation of kidney and kidney in the process of compiling and using ZFN Sall1 KO cell nuclear transfer embryos were obtained and kidney formation was completed. The presence and disappearance of Sall1 gene was confirmed by analysis of kidney tissue and trace. The expression of the above gene is induced by the expression of the gene. The results of this study provide an important basis for future research on the knowledge and technology of device regeneration.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ゲノム編集と体細胞クローニングによる免疫不全ブタの作出

通过基因组编辑和体细胞克隆培育免疫缺陷猪

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
中野和明;渡邊將人;松成ひとみ;小林美里奈;松村幸奈;坂井理恵子;倉本桃子;林田豪太;浅野吉則;内倉鮎子;梅山一大;長屋昌樹;花園豊;長嶋比呂志
通讯作者：
長嶋比呂志

Practical application of the hollow fiber vitrification method for cryopres ervation of mammalian embryos

中空纤维玻璃化冷冻方法在哺乳动物胚胎冷冻保存中的实际应用

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
Uchikura A;Wakayama T;Wakayama S;Matsunari H;Maehara M;Matsumura Y;Nakano K;Sasaki E;Okahara J;Tsuchiya H;Nakauchi H;Nagashima H
通讯作者：
Nagashima H

Production efficiency of gene knockout pigs using genome editing and somatic cell cloning

利用基因组编辑和体细胞克隆的基因敲除猪的生产效率

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hitomi Matsunari;Masahito Watanabe;Kazuaki Nakano;Ayuko Uchikura;Yoshinori Asano;Shota Hatae;Toki Takeishi;Kazuhiro Umeyama;Masaki Nagaya;Shuji Miyagawa;Yutaka Hanazono;Hiromitsu Nakauchi;Hiroshi Nagashima
通讯作者：
Hiroshi Nagashima

DNA methylation profiles provide a viable index for porcine pluripotent stem cells.

DNA甲基化谱为猪多能干细胞提供了一个可行的指数。

DOI：
10.1002/dvg.22423
发表时间：
2013-11
期刊：
GENESIS
影响因子：
1.5
作者：
Arai, Yoshikazu;Ohgane, Jun;Fujishiro, Shuh-hei;Nakano, Kazuaki;Matsunari, Hitomi;Watanabe, Masahito;Umeyama, Kazuhiro;Azuma, Dai;Uchida, Naomi;Sakamoto, Nozomu;Makino, Tomohiro;Yagi, Shintaro;Shiota, Kunio;Hanazono, Yutaka;Nagashima, Hiroshi
通讯作者：
Nagashima, Hiroshi

中空糸法によるブタ透明除去胚および分離割球のガラス化保存

中空纤维法玻璃化保存猪透明胚胎及分离卵裂球