ヘリコバクター・ピロリ菌ＣａｇＡの病原／発がん生物活性を規定する分子構造基盤

幽门螺杆菌 CagA 致病/致癌生物活性的分子结构基础

• 批准号: 13J06186
• 负责人: 長瀬 里沙
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J06186/
• 关键词: ピロリ菌; CagA

本研究ではピロリ菌CagAタンパク質とその細胞内標的分子との相互作用を構造生物学的ならびに速度論的側面から解析することにより、CagAによる胃がん発症の分子基盤を解明することを目的としている。精製したチロシンリン酸化CagAとSHP2を用いて表面プラズモン共鳴法によりCagAとSHP2の解離定数を測定した結果、CagAのEPIYA領域数が1個から2個へ増加する際にCagA-SHP2複合体の結合親和性が最も大きく増強されることが明らかとなった。また、GSTタグを付加したSHP2とチロシンリン酸化CagAを用いたGSTプルダウンアッセイにおいても単一のEPIYA領域を有するCagAと比較してEPIYA領域を2個以上持つCagAはSH2ドメインと効率よく複合体を形成した。次に、CagAのEPIYA領域数とCagAの病原性および発がん性との関係をさらに解析するため、様々な数のEPIYA領域を保持するCagA変異体を発現させた胃上皮由来AGS細胞を用いて、コラーゲンゲル浸潤アッセイを行った。その結果、EPIYA領域を１つ持つCagAを発現させた細胞においてはコラーゲンゲルへの侵入がほとんど見られなかったが、EPIYA領域を２個以上持つCagA発現細胞においてはコラーゲンゲルへの侵入が大きく増強する傾向が認められた。昨年度より、結晶構造解析を用いてCagA-SHP2複合体の三次元立体構造解析を目指し、精製したチロシンリン酸化CagAとSHP2のSH2ドメインとの共結晶化を行っている。当初、全長CagA（1186残基）とSHP2のCagA結合部位であるSH2ドメインを用いて共結晶化を行っていたが、良好な結晶が得られなかった。そこで結晶化の妨げとなりそうな部位を除いたCagA（261-1076 残基）を作製してSH2ドメインとの共結晶化を行っている。

This study で は ピ ロ リ bacteria CagA タ ン パ ク qualitative と そ の target molecules in cells と の を interaction of structural biology な ら び に speed on the side of the か ら parsing す る こ と に よ り, CagA に よ る stomach が ん 発 disease の molecular base plate を interpret す る こ と を purpose と し て い る. Refined し た チ ロ シ ン リ ン acidification CagA と SHP2 を with い て surface プ ラ ズ モ ン resonance method に よ り CagA と SHP2 の dissociation constant を determination し た results, CagA の EPIYA several が 1 か ら 2 へ raised plus す る interstate に CagA - SHP2 complex の combined with affinity が も most big き く raised strong さ れ る こ と が Ming Youdaoplaceholder0 となった. ま た, GST タ グ を plus し た SHP2 と チ ロ シ ン リ ン acidification CagA を with い た GST プ ル ダ ウ ン ア ッ セ イ に お い て も 単 a の を EPIYA field have す る CagA と compare し て を EPIYA field more than 2 hold つ CagA は SH2 ド メ イ ン と sharper rate よ く complex を form し た. に, CagA の EPIYA several と CagA の pathogenicity お よ び 発 が ん sex と の masato is を さ ら に parsing す る た め, others 々 な number の を EPIYA field keep す る CagA - variant を 発 now さ せ た gastric epithelial origin AGS cells を using い て, コ ラ ー ゲ ン ゲ ル infiltrating ア ッ セ イ を line っ た. そ の results, EPIYA を 1 つ hold つ CagA を 発 now さ せ た cells に お い て は コ ラ ー ゲ ン ゲ ル へ の intrusion が ほ と ん ど see ら れ な か っ た が, EPIYA を 2 or more hold つ CagA 発 now cells に お い て は コ ラ ー ゲ ン ゲ ル へ の intrusion が き く raised strong す る tendency が recognize め ら れ た. Yesterday's annual よ り, crystal structure analytic を い て CagA - SHP2 complex three dimensional の three-dimensional structure parsing を refers し, refined し た チ ロ シ ン リ ン acidification CagA と SHP2 の SH2 ド メ イ ン と の total crystallization を line っ て い る. At the beginning, the total length of CagA (1186 residues) と SHP2 の CagA combining site で あ る SH2 ド メ イ ン を with い て total crystallization を line っ て い た が, good crystallization な が ら れ な か っ た. そ こ で crystallization の hinder げ と な り そ う を な parts except い た CagA を residues (261-1076) for making し て SH2 ド メ イ ン と の total crystallization を line っ て い る.

项目成果

ヘリコバクター・ピロリがんタンパク質CagAの分子多型と生物活性

幽门螺杆菌癌蛋白CagA的分子多态性及生物活性

• 发表时间: 2013
• 作者: T. Tamura;W. Liu;T. Akutsu;八尾寛;長瀬 里沙
• 通讯作者: 長瀬 里沙

Influence of EPIYA-C Repeat Number on the Intaraction of Helicobacter pylori Oncoprotein CagA with SHP2 Phosphatase

EPIYA-C重复次数对SHP2磷酸酶结合幽门螺杆菌癌蛋白CagA的影响

• 发表时间: 2013
• 作者: Lisa Nagase;Masanori Hatakeyama
• 通讯作者: Masanori Hatakeyama

ピロリ菌CagAによる宿主分子攪乱機構の構造と機能

H. pylori CagA 宿主分子扰动机制的结构和功能

• 发表时间: 2014
• 作者: 林剛瑠;長瀬里沙;西川裕子;千田美紀;千田俊哉;畠山昌則
• 通讯作者: 畠山昌則