ゲノム損傷応答ネットワークにおけるＤＤＢ２タンパク質の機能解析

DDB2蛋白在基因组损伤反应网络中的功能分析

• 批准号: 13J03688
• 负责人: 松本 翔太
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J03688/
• 关键词: DDB2; UV-DDB; ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; XPE; アセチル化; ユビキチン化

損傷認識タンパク質DDB2 (XPE) は、皮膚がんの高発を特徴とする遺伝病である色素性乾皮症E群の原因遺伝子産物であり、紫外線によって生じる主なDNA損傷である6-4光産物およびシクロブタン型ピリミジン二量体 (CPD) に対して特異的に結合し、ヌクレオチド除去修復反応の開始に寄与する重要な因子である。DDB2のN末端テール領域が担う機能を調べるため、N末端領域に存在する7か所のリジン残基に変異を導入したDDB2を、ヒト正常線維芽細胞に安定発現させることでさまざまな変異DDB2発現株を樹立した。これらの細胞株は損傷修復活性とは独立して、変異の種類に応じて細胞がさまざまな紫外線感受性を示すことがわかった。そこで、DDB2のN末端領域のリジン残基を介して相互作用因子と協調して細胞の紫外線応答に関わっているのではないかと考え、DDB2の新規相互作用因子の探索を行うことにした。二重タグを融合した野生型あるいは上記で用いた変異DDB2をHeLa細胞に安定発現させ、二重タグDDB2発現細胞株を樹立した。この細胞株を大量培養した後、相互作用因子を含むDDB2複合体を単離し、質量分析により複合体に含まれる構成因子の同定を行った。その結果、野生型DDB2および変異DDB2に特異的に結合する新規相互作用因子を多数同定した。一方、全てのDDB2に含まれている新規相互作用因子としてクロマチンリモデリング因子のサブユニットやアポトーシス関連因子を同定し、これらの因子はN末端領域の変異により相互作用が減弱した。ここで同定されたサブユニットをsiRNAにより発現抑制したところ、細胞はCPD修復速度の低下を引き起こした。本研究から、DDB2がさまざまな相互作用因子と協調して働き、既知の紫外線損傷認識としての機能に加えてアポトーシス制御やクロマチンリモデリングといった新たな機能を担う可能性が示唆された。

/ In addition to the correction, you will start to send it to the important factors. In the N-terminal field of DDB2, there is a high level of molecular weight in the N-terminal domain. In the field of N-terminal, the residues in the N-terminal are involved in the DDB2, and the normal-line maintenance of germ cells is stable and stable. In the field of N-terminal, there is a positive reaction in DDB2. The sensitivity of the cell line to the UV line was detected by the cell line sensitivity test. The DDB2 N-terminal domain residues were introduced into the interaction factor coordination cell UV response, DDB2 new rule interaction factor exploration and so on. The cells of the wild type were fused with DDB2 HeLa and the cell lines of the wild type were found to be stable and stable, while the cell lines of the wild type were found to be stable. After a large number of cell lines were cultured, the interaction factors included DDB2 replicates, quantitative analysis, DNA clones, homologous factors. The results showed that most of the new rule interaction factors were the same as those of the wild-type DB2DB2 epidemic DDB2 special gene. On the other hand, the whole DDB2 contains the new regulation interaction factor, the interaction factor and the interaction factor. In the same way, you can see that the speed of CPD repair is low, and the speed of CPD repair is slow. In this study, DDB2 experiments show that the interaction factors are co-ordinated with each other, and it is known that the ultraviolet ray is able to increase the ability to control the impact of the impact on the performance of the system, and the possibility that the new mechanism can be used.

项目成果

Functional analyses of the modification of DDB2 in DNA damage responses

DDB2 修饰在 DNA 损伤反应中的功能分析

• 发表时间: 2014
• 作者: Mizuuchi Y;Aishima S;Ohuchida K;Shindo K;Fujino M;Hattori M;Miyazaki T;Mizumoto K;Tanaka M;Oda Y;Syota Matsumoto
• 通讯作者: Syota Matsumoto

Functional interactions between XPC and DDB2 in nucleotide excision repair

XPC 和 DDB2 在核苷酸切除修复中的功能相互作用

• 发表时间: 2014
• 作者: 塚田千恵;辻琢磨;松尾光一;小川智史;野本豊和;家路豊成;アーリップ・クトゥルク;沢田正博;生天目博文;谷口雅樹;太田俊明;吉田朋子;八木伸也;Syota Mastumoto
• 通讯作者: Syota Mastumoto