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高次元クロマチン損傷を対象としたヌクレオチド除去修復機構の分子基盤の解明

阐明针对高维染色质损伤的核苷酸切除修复机制的分子基础

基本信息

批准号：
22K18034
负责人：
松本翔太
金额：
$ 3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K18034/
关键词：
DNA修復ヌクレオチド除去修復 NER XPC TFIIH XPA ヌクレオソームクロマチン

项目摘要

ほ乳類のヌクレオチド除去修復（NER）は紫外線などによって生じたDNA損傷を取り除く、重要なDNA修復機構の一つである。ゲノム全体を対象としたNERでは、まずXPC複合体が損傷を認識することが必須であり、その後XPA、TFIIHをはじめとするNER因子群がリクルートされ、これらの働きにより損傷が切り出される。生化学的な実験により、詳細なNER機構の全容が明らかになりつつあるが、細胞内におけるNERについては不明な点が多く残されている。特筆すべきは生物のゲノムがとるクロマチン構造というユニークなDNA格納様式である。真核生物のゲノムDNAはヒストンタンパク質に高度に折り畳まれたクロマチン構造を構成することがわかっており、タンパク質がDNAへアクセスする際に空間的な制限を受けている。そのためヒストンフリーなDNAを基質として進めてきた生化学解析では、細胞内で起こるNERの全容を理解することが難しい。そこでクロマチン上の損傷に対するNERを理解することが期待されている。そこで研究代表者はクロマチン構造の最小単位であるヌクレオソームを試験管内で再構成することで、ヌクレオソーム上の損傷に対するNERを明らかにすることを目指した。まずDNAに紫外線損傷や損傷をミミックした構造体を化学合成し、これを元にヌクレオソームを再構成することで、ヌクレオソームの任意の位置に損傷をデザインする系を確立した。続いてNERタンパク質を試験管内再構成系に使用するため、NER因子であるXPC複合体、XPA、TFIIHをそれぞれ発現するバキュロウイルスシステムを構築した。これらを用いることにより、ヌクレオソーム上の任意の位置の損傷に対するNER機構を試験管内で再現することを目指した。

DNA repair (NER) is an important part of DNA repair. All of these factors are related to the XPC complex and the damage is recognized. Biochemistry is the essence of the body, the details of the body, the cells, the details of the body, the details of the body. The structure of the organism is very complex. Eukaryotic organisms are subject to spatial constraints in the formation of highly conserved DNA structures. DNA matrix analysis is difficult to understand in vivo. It is also expected that NER will be understood about the damage on the keyboard. The research representative pointed out that the minimum unit of the structure of the test tube was the same as that of the test tube. DNA damage is caused by chemical synthesis of DNA, and DNA damage is caused by chemical recombination of DNA. The inner quality test tube reconstruction system uses the inner quality test tube reconstruction system to construct the inner quality test tube reconstruction system using the inner quality test tube reconstruction system. The damage to the inner wall of the tube is caused by the presence of the inner wall.