脂質ラフトと膜貫通型キナーゼの協働によるシグナル変換機構：１分子追跡による研究

脂筏与跨膜激酶合作的信号转导机制：单分子追踪研究

• 批准号: 13J01859
• 负责人: 平本(山木) 菜央 (2015-2017)
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J01859/
• 关键词: 1分子追跡法; ライブイメジング; 細胞膜; シグナル伝達; 免疫反応; １分子イメジング; 細胞内シグナル伝達; 1分子イメジング; ラフト; 拡散係数; GPIアンカー型タンパク質

本研究の目的は、免疫シグナルに重要な役割を担う、IgE抗体の受容体であるFceRIとシグナルアダプター分子SLP-76およびLATの相互作用および活性化の機構の解明である。これまでに、マスト細胞様細胞株RBL-2H3において、抗原刺激有無に関係なくLATとSLP-76の共局在は見られなかった。つまり、従来考えられてきたSLP-76-LATの安定的複合体形成とは異なる分子挙動を示すことを明らかにしてきた。今年度は、SLP-76と相互作用することが報告されている膜結合分子 (LAT1、LAT2、LAT1/2、あるいはCD6) について、CRISPR/Cas9システムを用いて内在性分子発現をなくした。これらのノックアウト (KO) 細胞を用いて、SLP-76や下流エフェクター分子の動きを１分子イメジングで検討したところ、LAT1/2ダブルKO細胞では、SLP-76が巨大で安定なクラスターを形成することを見出した。さらにこのSLP-76クラスターには常に下流分子Vav1が共局在することが分かった。また、CD6の関与はこれまでT細胞でしか報告されていなかったが、CD6KO細胞ではSLP-76の膜リクルート挙動に変化はなかったが、膜へリクルートされてくるVav1の頻度と膜滞在時間が増加した。対して、LAT1あるいはLAT2単独をKOしただけでは、野生型細胞と比較して変化なかった。これらのことから、マスト細胞において、① LAT1とLAT2の機能は相補的である、 ② LAT1/2の他にSLP-76を強固に膜結合させる分子 (X) が存在する、③ LAT1/2が分子XとSLP-76の結合を阻止している可能性がある、さらに ④ 新規FceRIシグナル伝達分子CD6がSLP-76への下流エフェクター分子リクルートに関与している、ことが示唆された。

The aim of this study was to elucidate the mechanism of interaction and activation of IgE receptors and SLP-76 and LAT in immune systems. Cell line RBL-2H3 was isolated from SLP-76 cells and treated with antigen-stimulating agents. SLP-76-LAT is a stable complex formed by molecular interaction. This year, SLP-76 interactions are reported in the membrane-bound molecules (LAT1, LAT2, LAT1/2, CD6), CRISPR/Cas9 interactions are reported in the intrinsic molecular development. The use of these cells, SLP-76 and LAT 1/2 cells in KO cells, SLP-76 and LAT 1/2 cells in KO cells, and SLP-76 cells in KO cells, SLP-76 and LAT1/2 cells in KO cells, SLP-76 cells in KO cells, and LAT1/2 cells in KO cells, SLP-76 cells in KO cells, and LAT 1/2 cells in KO cells. SLP-76 is a common downstream molecule. The frequency and duration of Vav1 in CD6 KO cells and SLP-76 cells increased. 1. The cell type of the cell is different from the cell type of the cell type. LAT1/2 and SLP-76 strongly bind to each other, LAT1/2 and SLP-76 bind to each other, LAT1/2 and SLP-76 bind to each other, LAT 1/2 and SLP-76 bind to each other, LAT1/2 bind to each other, LAT1/2 bind to SLP-76, LAT-76 bind to SLP-76, LAT 1/2 bind to SLP-76, LAT-76 bind This is the first time I've seen it.

项目成果

シグナル足場タンパク質LATを含む細胞内小胞は、免疫細胞において、自己完結型信号伝達場として働く：１分子観察法による研究

含有信号支架蛋白LAT的细胞内囊泡在免疫细胞中充当独立的信号转导场：使用单分子观察方法的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: 廣澤 幸一朗;平本-山木 菜央;吉田 謙太;野崎 梢平;角山 貴昭;唐 博;鈴木 健一;中山 和久;藤原 敬宏;楠見 明弘
• 通讯作者: 楠見 明弘

The LAT vesicle works as a self-contained signaling platform in mast cells; discovery by single molecule tracking (LAT小胞はマスト細胞の中で自己完結型信号伝達場として働く：１分子観察による解明)

LAT 囊泡作为肥大细胞中通过单分子追踪发现的独立信号平台；

• 发表时间: 2017
• 作者: 廣澤 幸一朗;平本-山木 菜央;吉田 謙太;野崎 梢平;角山 貴昭;唐 博;鈴木 健一;中山 和久;藤原 敬宏;楠見 明弘
• 通讯作者: 楠見 明弘

Ultrafast diffusion of a fluorescent cholesterol analog in compartmentalized plasma membranes.

• DOI: 10.1111/tra.12163
• 发表时间: 2014-06
• 期刊: Traffic (Copenhagen, Denmark)
• 作者: Hiramoto-Yamaki N;Tanaka KA;Suzuki KG;Hirosawa KM;Miyahara MS;Kalay Z;Tanaka K;Kasai RS;Kusumi A;Fujiwara TK
• 通讯作者: Fujiwara TK