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核酸のエピジェネティック修飾の化学的検出

核酸表观遗传修饰的化学检测

基本信息

批准号：
13F03342
负责人：
岡本晃充
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

RNAのエピジェネティックな修飾は、遺伝子発現、細胞分化、転写後の多くの生物学的機能を制御しており、その検出に対する研究が分子レベルで進められなければならない。しかしながら、RNA修飾に対する効果的な研究手法が未熟であり、チャレンジングな挑戦課題として残されている。上述のm6Aは以前からその存在は指摘されているところであるが、それを効率的に検出できる手法は開発されていない。したがって、配列選択的でかつ簡便で信頼できるm6A検出法が求められている。m6Aを認識する新しい酵素ALKBH5と呼ばれる酵素は、ノンヘム鉄と2-ケトグルタル酸を含む酸化酵素であり、m6Aを酸化的に脱メチル化する。ALKBH5は、m6Aの認識分子として有効かもしれない。本研究では、ALKBH5の核酸修飾を用いて、m6Aを配列特異的に認識する系を開発した。1) 酵素群の発現：ALKBH5 FL、ALKBH5 CD、Sortase Aを発現させた。ALKBH5については、特に精製を簡便化するためにチオレドキシン部分を連結したものを用意した。2) トランスペプチデーション：ALKBH5と核酸を結合するために、まずSortaseAを用いた。アジド基を含むGGGK-アジドとDBCO基を含むRNAを用意した。ALKBH5のC末端は、LPETGGで終えているので、それとGGGK-アジドおよびSortaseAと混合することにより、トランスペプチデーションを引き起こし目的のアジド修飾C末端を含むALKBH5を得ることができた。さらに、DBCO標識したRNAとアジド修飾ALKBH5を混合することにより、RNAが連結したALKBH5を得ることができた。3) m6Aの配列選択的脱メチル化について：候補になるm6A修飾RNAを合成した。前項で得られたRNA連結ALKBH5の量が本事件を行うには十分な量ではなかったため、追合成中である。

RNA gene modification, gene development, cell differentiation, post-production and biological function control, molecular development and research The research methods of RNA modification are immature and challenging. The above mentioned m6A has been found to exist in the past, but it has been found to exist in the past. A simple way to find out how to find out. M6A is recognized as a new enzyme ALKBH5, which contains an acidifying enzyme, an iron and 2-amino acid, and an acidifying enzyme. ALKBH5, m6A and cognitive molecules have been identified. This study provides insight into the use of ALKBH5 nucleic acid modifications and the alignment of m6A. 1)Discovery of enzyme group: ALKBH 5FL, ALKBH 5CD, Sortase A were discovered today. ALKBH5 is designed to simplify and simplify the process. 2)The first step is to combine ALKBH5 and sortaseA. The base contains GGGK and DBCO. ALKBH5 's C terminal contains GGGK-4 and SortaseA, and its C terminal contains ALKBH5. DBCO logo and RNA are linked to ALKBH5. 3)m6A is a candidate for the synthesis of m6A modified RNA. The first paragraph is about RNA linkage ALKBH5. The second paragraph is about RNA linkage ALKBH5. The third paragraph is about RNA linkage ALKBH5. The fourth paragraph is about RNA linkage ALKBH5. The fourth paragraph is about RNA linkage ALKBH 5.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

FTO-dependent demethylation of N6-methyladenosine regulates mRNA splicing and is required for adipogenesis.

N6-甲基腺苷的 FTO 依赖性去甲基化调节 mRNA 剪接，是脂肪生成所必需的

DOI：
10.1038/cr.2014.151
发表时间：
2014-12
期刊：
Cell research
影响因子：
44.1
作者：
通讯作者：

A nucleic acid probe labeled with desmethyl thiazole orange : A new type of hybridization-sensitive fluorescent oligonucleotide for live-cell RNA imaging

去甲基噻唑橙标记的核酸探针：一种用于活细胞 RNA 成像的新型杂交敏感荧光寡核苷酸

DOI：
10.1039/c2ob26707a
发表时间：
2013
期刊：
Org. Biomol. Chem.
影响因子：
0
作者：
Okamoto;A. ; Sugizaki;K. ; Yuki;M. ; Yanagisawa;H. ; Ikeda;S. ; Sueoka;T. ; Hayashi;G. ; Wang;D. O
通讯作者：
D. O

Characterization of the Triplet State of Hybridization-Sensitive DNA Probe by Using Fluorescence Correlation Spectroscopy

使用荧光相关光谱表征杂交敏感 DNA 探针的三重态