HIGHLY SELECTIVE AFFINITY PROBES--DNA & RNA POLYMERASES
高选择性亲和探针--DNA
基本信息
- 批准号:2291740
- 负责人:
- 金额:$ 2万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1993
- 资助国家:美国
- 起止时间:1993-06-01 至 1996-05-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
This collaborative project is directed at designing, synthesizing and
characterizing a new generation of crosslinkable derivatives of ribo and
deoxyribonucleotides to be used for structural probing of a variety of
polymerizing enzymes, including DNA and RNA polymerases of prokaryotic,
eukaryotic and viral origin. The approach is based on the highly
selective affinity labeling technique developed by the Russian colleagues
participating in the collaboration. Two classes of compounds will be
synthesized: (a) with reactive group positioned on the gamma-phosphate
and (b) with substitutions in the base ring of uracil. In each class,
crosslinking reagents specific to different amino acids, with different
mechanisms of activation, and with varying length of the reagent "arm"
will be prepared. Such types of nucleotide derivatives can be utilized
as substrates during in vitro enzymatic syntheses of DNA and RNA. Thus,
the reagents synthesized can be used for in vitro crosslinking to the
substrate or product binding site of the polymerase under study followed
by extension with the next radiolabeled nucleotide resulting in a
radioactive nucleotide reporter group crosslinked to the protein. The
site of the crosslinking can then be mapped using standard protein
chemical approaches. This proposal represents an expansion of the
currently active parent NIH grant (R0l GM30717) focused on site-directed
mutagenesis of RNA polymerase genes in E. coli and functional analysis of
the mutant enzymes. Mapping of functional sites using new affinity
reagents will be invaluable for planning and interpreting the genetic
experiments of the parent project.
这个协作项目旨在设计、合成和
新一代可交联型核糖核酸单酯衍生物的表征
脱氧核糖核苷酸用于多种结构探测
聚合酶,包括原核生物的DNA和RNA聚合酶,
真核生物和病毒的起源。该方法基于高度的
俄罗斯同事开发的选择性亲和标记技术
参与协作。将有两类化合物
合成:(A)反应基团定位在伽马-磷酸盐上
和(B)在尿嘧啶的基环上进行取代。在每个班级,
特定于不同氨基酸的交联剂,具有不同的
活化机理,并随试剂“臂”的长度变化
都会做好准备。可以利用这种类型的核苷酸衍生物
作为DNA和RNA体外酶促合成的底物。因此,
所合成的试剂可用于体外交联剂
所研究的聚合酶的底物或产物结合部位如下
延伸到下一个放射性标记的核苷酸导致
与蛋白质交联的放射性核苷酸报告基团。这个
然后,可以使用标准蛋白质来绘制交联点
化学方法。这项提议代表着对
目前活跃的母公司NIH拨款(R01 GM30717)专注于现场定向
核糖核酸聚合酶基因在大肠杆菌中的诱变及其功能分析
突变的酶。使用新的亲和力绘制功能位点图
试剂对于计划和解释基因将是无价的
父项目的实验。
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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