MOLECULAR BASIS OF YEAST KILLER PROTOXIN GENE EXPRESSION

酵母杀手原毒素基因表达的分子基础

基本信息

  • 批准号:
    3290426
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 11.51万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1986
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1986-07-01 至 1989-06-30
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

We are attempting to elucidate basic molecular mechanisms underlying the production and specific immunity to a mycoviral toxin in the type 1 killer dsRNA system in S. cerevisiae. Our approach is a coordinate one utilizing both biochemical and genetic techniques. We anticipate that results from these studies will provide new insights into a variety of interrelated aspects of protein secretion and endoproteolysis in yeast relevant to protein processing in higher eucaryotes, and will further develop our understanding of the molecular biology of this mycoviral system, particularly with respect to mechanisms of toxin action and immunity function. The K1 system consists of a segmented dsRNA genome packaged cytoplasmically in virus-like particles (VLPs). The two predominant constituents are a 4.7 kilobase pair (kb) L-dsRNA, which encodes the major VLP capsid protein, and a 1.9 kb M-dsRNA. In previous studies we identified a 34.8 kilodalton (kd) preprotoxin as the primary translation product of M-dsRNA. Through gene fusion experiments employing a cDNA clone of the preprotoxin gene, we determined that both toxin and immunity determinants reside in this single molecule. The toxin consists of two 9.0-9.5 kd components, Alpha and Beta derived from a 43 kd glycosylated protoxin which has the sequence Delta-Alpha-Gamma-Beta. Delta is a 44 amino acid N-terminal leader, and Gamma, about 103 amino acids, is the site of glycosylation. Maturation follows the standard yeast secretory pathway defined by the SEC genes, and involves the additional function of chromosomal KEX (killer expression) and REX (resistance expression) loci. We plan to continue our studies by addressing several specific issues. We will evaluate the structure and function of the protein domains of protoxin by site-specific mutagenesis. This will include identification of the cellular component responsible for immunity. We will define components that interact and participate in toxin and immunity production and function by isolation and characterization of second-site suppressors of various protoxin mutants. Finally, we will analyze the role of the N-terminal Delta sequence and the central Gamma sequence in intracellular transit and processing of the preprotoxin.
我们正试图阐明基本的分子机制, 1型杀手对真菌病毒毒素的产生和特异性免疫 dsRNA系统在S.啤酒。 我们的方法是一种协调的方法, 生物化学和基因技术。 我们预计, 这些研究将为各种相互关联的问题提供新的见解 酵母中蛋白质分泌和内蛋白水解的方面 蛋白质加工在高等真核生物,并将进一步发展我们的 了解这种真菌病毒系统的分子生物学, 特别是在毒素作用和免疫机制方面 功能 K1系统由细胞质包装的节段dsRNA基因组组成 病毒样颗粒(VLP)。 两个主要的成分是4.7 编码主要VLP衣壳蛋白的内切酶对(kb)L-dsRNA,和 1.9kb的M-dsRNA。 在以前的研究中,我们确定了一个34.8千道尔顿(kd) 前原毒素作为M-dsRNA的主要翻译产物。 通过基因 采用前原毒素基因的cDNA克隆的融合实验,我们 确定毒素和免疫决定因素都存在于这个单一的 分子。 该毒素由α和β两种9.0- 9.5kd组分组成 衍生自43 kD糖基化原毒素,其具有以下序列 三角洲阿尔法伽马贝塔 Delta是44个氨基酸的N-末端前导序列, γ,约103个氨基酸,是糖基化位点。 成熟 遵循SEC基因定义的标准酵母分泌途径, 涉及染色体KEX(杀伤表达)的额外功能, 雷克斯(抗性表达)基因座。 我们计划通过处理几个具体问题来继续我们的研究。 我们 将评估原毒素蛋白质结构域的结构和功能 通过位点特异性诱变。 这将包括确定 负责免疫的细胞成分。 我们将定义组件 它们相互作用并参与毒素和免疫的产生和功能 通过分离和表征各种第二位点抑制子, 原毒素突变体 最后,我们将分析N-末端的作用。 细胞内转运中的δ序列和中心γ序列, 前原毒素的加工。

项目成果

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