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STRUCTURE/FUNCTION OF E COLI TRANSCRIPT CLEAVAGE FACTORS

STRUCTURE/FUNCTION OF E COLI TRANSCRIPT CLEAVAGE FACTORS
大肠杆菌转录切割因子的结构/功能
批准号:
6180808
负责人:
SERGEI BORUKHOV
金额:
$19.45万
依托单位国家:
美国
项目类别:
财政年份:
1996
资助国家:
美国
项目状态:
已结题
起止时间:
1996-05-01 至 2001-11-30

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
据推测,原核转录物切割因子GreA和GreB 有两个重要的生物学和进化上保守的功能: 抑制转录停滞和增强 转录保真度 这些功能是通过以下能力来实现的: 诱导三元复合物中新生RNA裂解的Gre因子 RNA聚合酶。 本项目的主要目标是了解 分子作用机制和结构-功能关系 大肠杆菌中的GreA和GreB。 为此,三种类型的 将进行实验。 第一,确定功能重要性 Gre因子的位置,Gre A和Gre B的氨基酸残基, 根据它们已建立的三维结构, 表面将被诱变。 然后突变蛋白质 使用特异性体外转录测定进行生物化学表征 和结构上的差异。 第二类实验是 目的是详细研究基本的“补丁”的Gre分子形成的, 带正电荷的表面暴露残留物。 为此,一系列 将构建携带各种大小的基本斑块的突变体, 将对所得到的突变因子进行功能分析, 生物化学 一个模型,涉及基本残留的补丁 在RNA聚合酶的内在溶核位点的激活中, 测试. 最后,研究了Gre A和Gre B与RNA聚合酶的相互作用 将使用蛋白质-蛋白质光化学交联进行研究。 的Cys 通过定点突变将残基引入Gre蛋白中 选定的表面暴露的残基,然后用 巯基特异性光活性双功能试剂。 所得的修饰 Gre蛋白将用于探测与RNA聚合酶的相互作用, 转录延伸的不同阶段。
英文摘要
The prokaryotic transcript cleavage factor GreA and GreB are presumed to have two biologically important and evolutionarily conserved functions: the suppression of transcription arrest and the enhancement of transcription fidelity. These functions are accomplished by the ability of Gre factors to induce the cleavage of the nascent RNA in ternary complexes of RNA polymerase. The broad goal of this project is to understand the molecular mechanism of action and the structure-functional relationships of GreA and GreB in Escherichia coli. For this purpose, three types of experiments will be conducted. First, to identify functionally important localities of Gre factors, the amino acid residues of Gre A and Gre B that, according to their established 3-D structure, are located on the protein surface will be mutagenized. The mutant proteins will be then characterized biochemically using specific in vitro transcription assays and structurally by X-ray analyses. The second type of experiments are aimed at detailed studies of the basic "patches" of Gre molecules formed by positively charged surface-exposed residues. To this end, a series of Gre mutants will be constructed that carry basic patches of various sizes and the resulting mutant factors will be analyzed functionally an biochemically. A model that implicates the basic residues of the patches in activation of the intrinsic nucleolytic site in RNA polymerase will be tested. Finally, the interactions of Gre A and Gre B with RNA polymerase will be studied using protein-protein photochemical crosslinking. The Cys residues will be introduced into Gre proteins by site-directed mutagenesis of selected surface-exposed residues followed by their derivatization with thiol-specific photoactive bifunctional reagents. The resulting modified Gre proteins will be used to probe the interactions with RNA polymerase at different stages of transcription elongation.
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Untangling the mechanisms of initiation and discontinuous RNA synthesis by COVID-19 RdRp
Untangling the mechanisms of initiation and discontinuous RNA synthesis by COVID-19 RdRp
STRUCTURE/FUNCTION OF E COLI TRANSCRIPT CLEAVAGE FACTORS
  • 批准号:
    2701734
  • 项目类别:
  • 资助金额:
    $18.01万
  • 财政年份:
    1996
  • 负责人:
    SERGEI BORUKHOV
  • 依托单位:
STRUCTURE/FUNCTION OF E COLI TRANSCRIPT CLEAVAGE FACTORS
  • 批准号:
    2910234
  • 项目类别:
  • 资助金额:
    $18.71万
  • 财政年份:
    1996
  • 负责人:
    SERGEI BORUKHOV
  • 依托单位:
国内基金
海外基金
asr基因调控酸诱导的Escherichia coli O157:H7形成VBNC状态的机制研究
  • 批准号:
    32302245
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    30.00万元
  • 批准年份:
    2023
  • 负责人:
    潘寒姁
  • 依托单位:
小肠中Escherichia coli分泌细菌毒素诱导肠屏障损伤及细菌易位在炎症性肠病中的机制研究
  • 批准号:
    82371775
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    46万元
  • 批准年份:
    2023
  • 负责人:
    朱慧媛
  • 依托单位:
基于Escherichia coli O157:H7亚致死态细胞探究超高压与原儿茶酸协同杀菌机制
  • 批准号:
    31871817
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    60.0万元
  • 批准年份:
    2018
  • 负责人:
    孙爱东
  • 依托单位:
肠肝轴:从临床患者分离的肠道致病菌株Escherichia coli NF73-1对非酒精性脂肪性肝病的作用及机制研究
  • 批准号:
    81873549
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    57.0万元
  • 批准年份:
    2018
  • 负责人:
    刘玉兰
  • 依托单位: