EXPRESSION AND STRUCTURE/FUNCTION OF COBALAMIN BINDING PROTEINS

钴胺素结合蛋白的表达和结构/功能

基本信息

  • 批准号:
    6105242
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 15.53万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1999-01-01 至 1999-12-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

The transport system involving intrinsic factor (IF) and its receptor (IF-Rec) is only one of a few well characterized receptor-mediated systems in mammalian intestine whereby ligands can be absorbed into the enterocyte and eventually into the blood. Similar receptor-mediated transport systems involve the other cobalamin (cbl) binding proteins, including R protein or haptocorrin (hepatocyte) and transcobalamin II or TCII (all somatic cells). This grant will study the physiology and structural interactions of these transport systems, with particular emphasis on IF. We have isolated CDNA clones encoding the entire structural regions of rat and human IF and of hog R protein, and genomic clones that identify all the axons of human IF with the exception of the first 30 bp of the 5' UT portion of the CDNA. We have expressed rat IF in a eukaryotic system (COS-1 cells), and found that it can be active in the absence of N-glycosylation. Assays are available to follow the binding of cbl to IF, and of IF-cbl to brush border membranes, using IF produced either by transfection or in a cell-free system. IF and haptocorrin have been found immunologically to coexist in cells of foregut tissues, i.e. the gastric mucosa, and in ductal cells of the salivary glands and pancreas. We have also identified a haptocorrin receptor in intestine, corresponding with the minor 49-54 Kda subunits of the hepatic asialoglycoprotein receptor (ASGP-R). Human TCII has been cloned by other workers. We propose to produce radiolabelled IF in stably transfected cells to use for metabolic studies, to identify the cbl and receptor binding regions of IF, to study the fate of labelled IF in vivo in the rat and in vitro using Caco-2 cells, to study the secretory pathway of IF and haptocorrin in gastric parenchymal cells, and in salivary and pancreatic ductal cells, to isolate and study further the importance of the intestinal ASGP-R, and to isolate a TCII clone to transfect Caco-2 cells, to test an hypothesis that TCII production is rate of limiting for cbl absorption. Methods used will include transfection of eukaryotic cells, transformation of prokaryotic cells, deletional and in situ mutagenesis analysis, cell fractionation of enterocytes and tissue culture cells (Core C), immunolocalization and autoradiography (Core B), and CDNA sequencing and oligonucleotide production (Core A).
涉及内在因子(IF)及其受体的转运系统 (IF-Rec)只是少数几个特征良好的受体介导的之一 哺乳动物肠道中的系统,通过该系统,配体可以被吸收到 肠道细胞,并最终进入血液。相似受体介导的 运输系统涉及其他钴胺(CBL)结合蛋白, 包括R蛋白或触角蛋白(肝细胞)和转钴胺II或 TCII(所有体细胞)。这笔助学金将学习生理学和 这些运输系统的结构相互作用,特别是 强调如果。我们已经分离出编码整个CDNA的克隆 大鼠和人IF和猪R蛋白的结构区以及基因组 识别人类IF所有轴突的克隆,但 CDNA 5‘UT部分的前30个碱基对。我们已经表达了RAT IF 在一个真核系统(COS-1细胞)中,发现它可以在 N-糖基化缺失。可根据以下情况进行检测 使用IF将CBL与IF结合,并将IF-CBL与刷子边界膜结合 通过转基因或在无细胞系统中产生的。如果和 已发现在免疫学上,触角蛋白共存于细胞内。 前肠组织,即胃粘膜,以及在猪的导管细胞中 唾液腺和胰腺。我们还鉴定出了一种触角蛋白 肠道中的受体,对应于49-54个KDA亚基 肝脏去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)。人类TCII已经被 被其他工蚁克隆。我们建议在以下情况下生产放射性标签 用于代谢研究的稳定转染细胞,以鉴定 CBL和受体结合区的IF,以研究标记的IF的命运 用Caco-2细胞在大鼠体内和体外研究 IF和结合角蛋白在胃实质细胞中的分泌途径 并在唾液和胰腺导管细胞中分离和研究 进一步阐明肠道ASGP-R的重要性,并分离出TCII 克隆转染Caco-2细胞,以验证TCII的假设 产量是CBL吸收的极限速度。使用的方法将 包括真核细胞转染法、原核转化法 细胞,缺失和原位突变分析,细胞分离 肠细胞和组织培养细胞(核心C),免疫定位和 放射自显影(核心B)、CDNA测序和寡核苷酸 生产(核心A)。

项目成果

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    $ 15.53万
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Anti-Malarial Agents Targeting Apical Membrane Antigen 1
针对顶膜抗原 1 的抗疟药
  • 批准号:
    nhmrc : 1098884
  • 财政年份:
    2016
  • 资助金额:
    $ 15.53万
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  • 批准号:
    BB/L007584/1
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  • 资助金额:
    $ 15.53万
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  • 资助金额:
    $ 15.53万
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  • 资助金额:
    $ 15.53万
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