Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Cholangiocarcinoma

肝内胆管细胞癌(ICC)是一种侵袭性较强的肝脏和肿瘤患者，其治疗方案选择有限，为期5年。 存活率不到10%。中国国际刑事法院的特点是其高度恶性的促结缔组织再生障碍性疾病，以及大量的癌症-- 相关成纤维细胞(CAF)和细胞外基质(ECM)的作用仍然存在。 有争议的原因是体内研究中的功能研究非常匮乏，而体外研究中的绝大多数国际刑事法院的研究则支持一项新的研究。 最近的研究表明，CAF的促癌作用与胰腺癌的内源性发病有关，是一种高度危险的促结缔组织增生性疾病。 肿瘤与国际刑事法院有许多相似之处，但已有研究表明，咖啡馆可以抑制癌症的生长。在这里，我们将寻求解决问题的方法。 问题是，咖啡馆是应该促进国际刑事法院的发展，还是应该限制国际刑事法院的发展，而是使用大量的新技术和特定于细胞的技术工具来进行操纵。 CAF肿瘤细胞和肿瘤细胞在体内内源性地产生于ICC细胞中，我们假设CAF细胞和ECM细胞之间存在相互作用。 提供一个利基市场，以促进国际商会的增长和生存，并提供对国际商会-CAF相声的详细描述。 我们将在新的肿瘤微环境中确定新的治疗靶点。在目标1中，我们将无法确定其主要作用。 CAF正在使用一种新颖的工具来进一步确定CAF的遗传功能抑制或早期CAF消融以及晚期CAF消融将如何影响CAF的生长。 增殖性细胞和抗凋亡性细胞信号转导通路，动物和小鼠的生存。在我们的目标2中，我们将继续调查这些通路。 这将调解中国国际刑事法院对咖啡馆成员的招募、增殖和激活机制，并将重点放在可能导致肿瘤的假设上。 细胞通过肿瘤来源的TGFb和PDGF1亚型和TGFb--介导正常的肝纤维化机制。 激活整合素，从而促进咖啡馆的细胞积聚和激活。此外，还需要进行详细的机制研究。 在基因敲除小鼠的体外和共培养中，我们还不能确定是否存在药物对CAF激活的抑制作用。 FDA批准的新药Nintdanib或其整合素阻断抗体可以抑制ICC的生长，并延长小鼠的生存时间。 在目标3中，我们将不再确定CAF通过哪些途径来调节CICC的增长，而是专注于以下假设 CAF来源的ECM激活肿瘤细胞隔间的促肿瘤信号。为了检验这一假设，我们 将研究具有CAF特异性COL1a1基因敲除或肿瘤选择性COL1a1基因敲除的小鼠的ICC发育 胶原敏感受体盘状结构域受体1(DDR1)。此外，我们将确定ECM是否- 肿瘤细胞中机械敏感信号的介导僵硬和随后的激活促进ICC 发展。我们将测量肿瘤硬度、机械敏感信号通路和DDR1的激活 在人类CCA样本中的表达，并将其与临床结果相关。刚性和DDR1在细胞周期调控中的作用 ICC生长和CAF-ICC串扰将在体外通过调节刚性和 分别与缺乏COL1a1或DDR1的CAF和ICC细胞共培养。综上所述，该委员会提出了两项研究建议。 中国将利用新的金融工具来回答国际金融领域一个长期存在的问题，并可能为中国国际刑事法院的目标定位提供更好的依据-- 咖啡馆的相声被认为是治疗这种毁灭性的恶性肿瘤的一种新颖的治疗策略。

Intrahepatic cholangiocarcinoma (ICC) is an aggressive liver tumor with limited therapeutic options and 5-­year  survival rates of less than 10%. ICC is characterized by its highly desmoplastic nature, with abundance of cancer-­ associated  fibroblasts  (CAF)  and  extracellular  matrix  (ECM).  The  role  of  CAF  and  ECM  in  ICC  remain  controversial due to the paucity of functional in vivo studies. While the majority of ICC in vitro studies support a  cancer-­promoting role of CAF, recent studies in endogenously arising pancreatic cancer, a highly desmoplastic  tumor with many similarities to ICC, have shown that CAF restrain cancer growth. Here, we seek to answer the  question  whether  CAF  promote  or  restrain  ICC,  using  a  number  of  novel  and  cell-­specific  tools  to  manipulate  CAF and tumor cells and their crosstalk in endogenously arising ICC in vivo. We hypothesize that CAF and ECM  provide a niche that promotes ICC growth and survival, and that detailed characterization of ICC-­CAF crosstalk  will  identify  novel  therapeutic  targets  within  the  tumor  microenvironment.  In  Aim  1,  we  will  determine  the  role  CAF using novel tools to determine how genetic CAF inhibition or early and late CAF ablation affect ICC growth,  proliferative and anti-­apoptotic signaling pathways, and mouse survival. In Aim 2, we will investigate pathways  that  mediate  the  recruitment,  proliferation  and  activation  of  CAF  in  ICC  focusing  on  the  hypothesis  that  tumor  cells hijack normal fibrogenic mechanism in the liver via tumor-­derived TGFb and PDGF isoforms and TGFb-­ activating integrins, resulting in accumulation and activation of CAF. In addition to detailed mechanistic studies  in knockout mice and in vitro co-­cultures, we will determine whether pharmacologic inhibition of CAF activation  by FDA-­approved drug Nintedanib or integrin-­blocking antibodies inhibit ICC growth and prolong mouse survival.  In Aim 3, we will determine pathways through which CAF modulate ICC growth, focusing on the hypothesis that CAF-derived ECM activates tumor-promoting signals in the tumor cell compartment. To test this hypothesis, we will investigate ICC development in mice with CAF-specific knockout of Col1a1, or tumor-selective knockout of collagen-sensing receptor discoidin domain receptor 1 (DDR1). In addition, we will determine whether ECM- mediated stiffness and subsequent activation of mechanosensitive signaling in tumor cells promote ICC development. We will measure tumor stiffness, activation of mechanosensitive signaling pathways and DDR1 expression in human CCA samples and correlate these to clinical outcomes. The role of stiffness and DDR1 in ICC growth and CAF-ICC crosstalk will be investigated in more detail in vitro through modulation of stiffness and by co-culturing CAF and ICC cells that lack Col1a1 or DDR1, respectively. In summary, the proposed studies  will employ novel tools to answer a long-­standing question in the field and may provide a basis for targeting ICC-­ CAF crosstalk as novel therapeutic strategy for this devastating malignancy.