Système de transfection cellulaire neon

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Mes travaux de recherche en biologie moléculaire et cellulaire nécessitent, sur une base routinière, d'introduire par transfection du matériel génétique (ADN plasmidique, siRNA...) dans des cellules en culture primaire dans le but d'analyser et caractériser les régions des promoteurs qui sont nécessaires afin d'assurer la transcription de plusieurs systèmes géniques. À ce jour, nous avons utilisé toute une panoplie d'approches expérimentales pour transfecter de l'ADN exogène dans des cellules en culture. Les plus couramment utilisées demeurent la formation d'un précipité insoluble de phosphate de calcium dans lequel l'ADN à introduire est trappé, ainsi que l'utilisation de lipides polycationiques (tel que la Lipofectine et la Lipofectamine). Toutefois, la plupart des cultures primaires de cellules humaines sont extrêmement difficiles à transfecter par ces approches. En effet, toutes les cultures primaires de cellules épithéliales provenant soit de peau, de cornées ou de rétines (cellules de Müller ou de l'EPR) humaines avec lesquelles nous travaillons présentement se sont révélées très difficile à transfecter efficacement, peu importe l'approche utilisée. Au cours des 20 dernières années, nous avons tenté sans succès de contourner cette difficulté en évaluant l'efficacité de nouvelles approches de transfection. Dans cette foulée, nous avons récemment évalué un appareil à électroporation (le 'NEON transfection system') vendu par la compagnie Invitrogen. À notre grand étonnement, nous sommes arrivés à introduire avec une très bonne efficacité tous les plasmides recombinants testés dans des cultures primaires de kératinocytes de peau humaine autrement impossibles à transfecter par d'autres approches. Toutefois, aucun laboratoire à l'Université Laval ne possède présentement cet appareil ou l'équivalent. Les travaux de recherche présentés dans cette demande requièrent donc de façon urgente l'achat d'un électroporateur compact qui nous permettra d'introduire de l'ADN par électroporation dans des primo-cultures de cellules humaines autrement extrêmement difficile à transfecter par les approches courantes. L'acquisition de cet appareil est donc très urgente puisque le travail de mes étudiants en dépend.