Étude de la relation structure/fonction du canal sodique épithélial: rôle de la partie extracellulaire dans la régulation du canal

运河管理关系结构/功能研究：ràle de la party extracellulaire dans la régulation du canal

• 批准号: RGPIN-2014-04569
• 负责人: Chraibi, Ahmed
• 金额: $ 1.89万
• 依托单位: Université de Sherbrooke
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Discovery Grants Program - Individual
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2014-01-01 至 2015-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=566603
• 关键词: tude; de; la; relation; structure

Le canal sodique épithélial, ENaC est une protéine transmembranaire impliquée dans de nombreuses fonctions physiologiques telles que la régulation de la pression sanguine, le contrôle de la clairance du fluide pulmonaire et la réabsorption du sodium dans le néphron distal sensible à l’aldostérone. Par sa localisation au niveau apical des cellules épithéliales, ENaC est exposé à une grande variation de la concentration du sodium et des protons extracellulaires. La fonction d’ENaC peut être régulée par plusieurs facteurs hormonaux (principalement l’aldostérone et la vasopressine) et des facteurs non hormonaux. Plusieurs travaux ont montré que le canal ENaC est régulé par le sodium extracellulaire (phénomène de self-inhibition), le pH et les sérine-protéases. Toutefois, la nature et les mécanismes moléculaires de ces différentes voies de régulation ainsi que le rôle fonctionnel de la partie extracellulaire du canal demandent à être bien élucidés. Notre programme de recherche a pour but d'étudier la relation structure fonction du canal ENaC et de clarifier les mécanismes de ces différentes voies de régulation. Nos objectifs spécifiques sont donc : 1) Déterminer les mécanismes moléculaires de la self-inhibition à l’échelle unitaire et explorer les paramètres biophysiques du canal pour comprendre ses modes d’activité en présence des différentes conditions physiologiques liées au sodium extracellulaire. 2) Identifier les résidus du domaine extracellulaire impliqués dans la self-inhibition. 3) Étudier les effets du pH extracellulaire sur la fonction du canal et identifier les acides aminés impliqués dans ces effets. 4) Déterminer les sites impliqués dans l’activation du canal par les sérine-protéases et étudier le lien entre cette activation et la régulation du canal par le pH et le sodium extracellulaires. Pour réaliser nos objectifs, nous allons utiliser la mutagenèse dirigée (alanine et cystéine scaning) et l’analyse fonctionnelle par deux techniques électrophysiologiques : le patch-clamp et le voltage-clamp. Une collaboration avec le Pr P. Lavigne de l’Université de Sherbrooke, nous permettra de combiner la modélisation moléculaire aux différentes approches utilisées dans notre laboratoire. Nos résultats préliminaires montrent l’importance de la région terminale de la partie extracellulaire du canal ‘knuckle domain’ et suggèrent l’existence d’une relation entre les trois voies de régulation que nous avons étudiées. Notre programme de recherche permettra de mieux comprendre le rôle de la partie extracellulaire d'ENaC dans la régulation de ce canal par le sodium et le pH extracellulaires. De plus, il nous permettra d'explorer les mécanismes moléculaires et les sites d'activation du canal par les sérine-protéases, une voie de régulation que nous avons mis en évidence.

ENaC是一种跨膜蛋白，具有调节血液压力、控制肺内液体流量和对钠在感觉神经远端的再吸收等生理功能。与上皮细胞顶端的niveau定位不同，ENaC是细胞外钠和质子浓度的一个微小变化。ENaC的基础可以由多个因素（主要是醛甾酮和加压素）和非因素组成。Plusieurs travaux ont montré que le canal ENaC est régulé par le sodium extracellulaire（phénomène de self-inhibition），le pH et les sérine-protéases.总之，这些不同的调节途径的性质和分子机制是因为需要管道的细胞外部分的功能作用是很好的。Notre programme de recherche a pour d'étudier la relation structure fonadium du canal ENaC et de clarifier les mécanismes de ces différentes voies de régulation.具体目标如下：1）确定单一细胞自我抑制的分子机制，探索细胞外Au钠在不同生理条件下的激活模式。2)自我抑制中隐含的细胞外结构域的标识符。3)Étudier les effets du pH extramellulaire sur la fonestrian du canal et identifier les acides aminés impliqués dans ces effets. 4)确定sérine-protéases激活髓腔的隐含位点，并研究pH值和细胞外钠激活髓腔和调节髓腔的作用。为了实现我们的目标，我们利用诱变剂（丙氨酸和胱氨酸扫描），并通过两种电生理学技术分析功能：膜片钳和电压钳。Une collaboration avec le Pr P. Lavigne de l'Université de Sherbrooke，nous permettra de combiner la modélisation moléculaire aux différentes approches utilisées dans notre laboratoire. Nos résultats préliminaires montrent l'importance de la région terminale de la partie extracellulaire du canal 'knuckle domain' et summerent l'existence d'une relationship entre les trois voies de régulation que nous avons étudiées. Notre programme de recherche permettra de mieux comprendre le role de la partie extracellulaire d'ENaC dans la régulation de ce canal par le sodium et le pH extracellulaires.此外，我们还可以探索分子机制和激活运河的地点，通过一条规则之路，使我们能够看到。