孕酮在家鸡蛋壳钙化形成中的作用机理研究

蛋壳形成于输卵管子宫部，孕酮对蛋鸡的产蛋行为发挥着重要作用。本课题对孕酮在蛋壳钙化形成时作用机理进行了深入研究。.1、产蛋高峰期的蛋鸡，蛋进入输卵管子宫部的不同时间点取蛋壳、子宫和血液，X射线能谱仪、扫描电镜测定蛋壳元素含量，内、外表面和横断面的超微结构；测定血钙含量和孕酮浓度；检测子宫部Cabp-d28k、Ca2+-ATPase、CA、PGR基因的表达规律。结果表明：蛋壳形成过程中钙沉积量逐渐增多，蛋进入子宫前1h到进入子宫5h钙沉积最多，之后钙沉积量减少；蛋壳形成过程中横断面变厚，椎体层逐渐形成，外表面裂隙的数量、深度及内表面的突起减少，纤维层的致密性、有序性下降；Cabp-d28k、Ca2+-ATPase表达量在蛋进入子宫15h达到最大，产蛋后逐渐下降，PGR呈先上升后下降的变化规律，CA在蛋进入子宫5h表达量最大，随后逐渐下降。.2、孕酮及其受体拮抗剂处理蛋鸡，蛋进入子宫不同时间点和不同处理组取样，结果表明：两种处理都能够增加蛋壳厚度和钙沉积；孕酮处理后蛋壳强度高于对照组，而拮抗剂处理则低于对照组，说明孕酮不仅能够增加蛋壳厚度，而且可以增强蛋壳强度，而拮抗剂组虽然增加了蛋壳厚度，但是蛋壳强度减弱；孕酮组蛋壳钙元素含量高于对照组（P＜0.01），拮抗剂组蛋壳钙元素含量高于对照组（P＜0.05）；孕酮抑制血钙含量升高，并对Cabp-d28k、Ca2+-ATP、CA表达起负调控作用；产蛋时间孕酮组大于对照组（P＜0.01），拮抗剂组小于对照组（P＜0.05）。.3、培养子宫内膜上皮细胞和基质细胞，免疫组化鉴定呈阳性。添加孕酮促进基质细胞的增殖(P<0.05)，孕酮+雌激素促进上皮细胞的增殖（P<0.05）；雌激素+孕酮对培养细胞中Cabp-d28K表达量有促进作用，孕酮单独作用对Cabp-d28k表达量的影响不显著；Cabp-d28k分布于子宫部黏膜上皮的纤毛上皮细胞游离端，免疫组化呈棕黄色，基底层也有少量分布；Cabp-d28k启动子中有与经典孕激素应答元件（PRE）相似的序列，Cabp-d28k表达变化与PR非常相似，尤其是在蛋鸡产蛋过程中体内注射孕酮后Cabp-d28k和PR基因表达量明显下降，分析认为孕激素与PR结合，分泌某种或某些因子抑制Cabp-d28k的表达，同时也表明孕酮对二者表达均起负调控作用，进一步揭示了孕酮在蛋壳钙化形成时的作用机理。