牛iPS细胞限定基因诱导和体外培养特性研究

诱导多能性干细胞(iPS细胞)作为新型的干细胞在人类再生医学、家畜转基因育种、动物疾病模型等方面具有着巨大的应用潜力。人和小鼠的iPS细胞通过限定基因诱导成功，但牛的iPS细胞尚未见报道。本课题以逆转录病毒介导限定基因诱导牛体细胞重构为iPS细胞，研究牛限定基因的构建导入及建立牛iPS细胞的限定基因诱导体系，探讨牛iPS细胞体外稳定生长传代的培养体系；通过二倍体嵌合和四倍体互补技术检测牛iPS细胞的胚胎嵌合能力和iPS细胞嵌合胚胎的生长发育能力；研究牛iPS细胞Oct4和Nanog多能性基因启动子区域、生长发育关键基因H19和Igf2r的DNA甲基化状况，分析检测牛iPS细胞基因重构程度；利用牛iPS细胞进行体细胞核移植，比较牛iPS细胞与牛胎儿成纤维细胞核移植重构胚发育能力的差异。通过牛iPS细胞的诱导、培养、检测分析、鉴定等平台的建立，为牛iPS细胞作为转基因载体应用奠定基础。