绵羊种布鲁氏菌019株感染的分子机制研究

绵羊种布鲁氏菌的感染宿主范围较小，仅感染绵羊、小鼠，不感染人。布鲁氏菌新疆019株是我国最早分离、鉴定的绵羊附睾型布鲁氏菌，流行病学调查显示，新疆绵羊种布鲁氏菌病流行的疫区，部分当地牧工的血清呈现R+反应，并出现布病临床症状，表明绵羊种布鲁氏菌新疆019株能感染人。本研究采用双向电泳、酵母双杂交技术等技术筛选差异外膜蛋白与人、羊巨噬细胞相互作用的结合蛋白，为揭示B.ovis 019株致病分子机制提供科学依据。本实验采用蛋白质双向电泳技术对绵羊种布鲁氏菌019株和标准株ATCC25480蛋白进行比较分析，发现了11个蛋白点表达丰度增加，5个蛋白点表达丰度下降，新增加蛋白5个，缺失2个，质谱技术分析23个结果，其中外膜蛋白有4个为omp31、VirB2、VirB8、omp25；成果获得了B.ovis 019株、标准株ATCC 25849侵染牛/人巨噬细胞文库，文库的重组率均在96%以上，构建的cDNA文库库容量均大于106，插入片段大小在0.2-4kb；构建了绵羊种布鲁氏菌019株和标准株ATCC25480外膜蛋白omp31、VirB2 、VirB8的诱饵蛋白，分别与绵羊/人巨噬细胞的cDNA文库进行互作，筛选到布鲁氏菌差异表达蛋白与巨噬细胞相互作用的蛋白有10个；同时完成了布鲁氏菌019株的全基因组测序，共获得31个scaffolds、722个contigs和3529个ORFs，经多基因组遗传进化比较分析和共线性分析，结果显示在基因组学水平上，布鲁氏菌019株与猪种布鲁氏菌同源性更高。本实验筛选并获得了019株、标准株外膜蛋白与牛/人巨噬细胞互作的结合蛋白，并对该菌株进行了全基因组测序，获得了全基因组信息，为进一步揭示B.ovis 019株跨宿主感染的分子机制奠定基础，为人布鲁氏菌病的药物靶点的选择提供科学依据。