新型CML特异性CTL应答诱导策略:CTP介导外源性BCR-ABL增强抗原交叉递呈及 DC疫苗研究
结题报告
批准号:
81501811
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
18.0 万元
负责人:
彭智
依托单位:
学科分类:
H2603.细胞学和血液学检验
结题年份:
2018
批准年份:
2015
项目状态:
已结题
项目参与者:
黄峥兰、黄世峰、彭辉、王海霞、曾瀚庆、张利军、高淼、刘静怡、颜艳
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中文摘要
BCR-ABL融合蛋白是CML细胞性特异抗原,也是CML DC疫苗的理想靶抗原。外源性白血病相关抗原在DC细胞内交叉递呈是诱导白血病特异性CTL应答的关键,但现有抗原负载系统不能有效激活DC细胞交叉递呈潜能,限制了DC疫苗抗白血病效能。胞质转导肽(CTP)具高效转导潜能和显著胞质定位特性,可将外源性抗原定位于胞质而实现“内源化”,而外源性抗原“内源化”是激活递呈潜能的前提。故我们提出“借CTP实现外源性BCR-ABL抗原交叉递呈以诱导CML特异性CTL应答”设想。拟通过表达纯化CTP-BCR-ABL融合蛋白并将其转入DC细胞,观察其在胞内的转导活性、亚细胞定位、交叉抗原递呈水平及其在体内外激活BCR-ABL特异性CTL应答的效应。本研究首次以DC细胞为基础,借CTP实现外源性BCR-ABL抗原交叉递呈,激活CML特异性CTL应答,有生物安全性好、靶抗原理想和增强DC细胞交叉递呈潜能等优势。
英文摘要
BCR-ABL fusion protein is a leukemia-associated antigen that is indispensable for CML cell survival, and is thus an ideal target antigen for DC vaccine against CML. While cross-presentation of exogenous leukemia-associated antigen in DC is key to the induction of leukemia-specific CTL response, the present antigen-loading system can’t efficiently activate the cross-presentation potential of DC, resulting in limited efficacy of DC vaccine in anti-leukemia therapy. Cytoplasmic transduction peptide (CTP), a transduction peptide with highly-efficient transduction potential and significant cytoplasmic localization preference, can accomplish the “internalization” of exogenous antigens through its preference of cytoplasmic localization. The “internalization” of the exogenous antigen is a prerequisite for the activation of cross-presentation potential. Therefore, we put forward the research assumption of “inducing CML-specific CTL response via the accomplishment of cross-presentation of exogenous BCR-ABL antigen with CTP”. Through prokaryotic expression and purification of the CTP-BCR-ABL fusion protein, we intend to observe its transduction activity, subcellular localization and cross-presentation in DC, and the in vitro and in vivo BCR-ABL-specific CTL response activated by the DC vaccine. This novel DC-based strategy of “activating the CML-specific CTL response via the accomplishment of cross-presentation of exogenous BCR-ABL antigen through CTP” shows great advantages in good biological safety, efficient activation of the cross-presentation potential of DC, and ideal target antigen.
慢性粒细胞白血病(CML)以酪氨酸激酶活性的BCR-ABL蛋白持续表达为主要特征。目前,针对BCR-ABL酪氨酸激酶活性的特异性小分子抑制剂使CML的治疗取得了很大的进展,但不能清除CML恶性克隆且部分患者出现耐药或复发。因此,急需进一步探讨CML治疗新策略。. BCR-ABL融合蛋白可作为CML的特异性抗原,是非常理想的免疫学靶标。我们人工合成胞质转导肽(CTP)融合抗原多肽,使抗原多肽在CTP的介导下直接穿透树突状细胞(DC)胞膜定位于胞质——全新的抗原负载系统刺激DC,通过激活交叉抗原途径经由MHC I类分子递呈而诱导CML特异性的免疫应答。. 我们用GM-CSF、IL-4诱导Balb/c小鼠骨髓细胞分化形成DC,通过流式细胞术检测其特异性表面分子表达,其中CD11c表达75.5%,CD86表达42.5%,MHC I类分子表达93.3%,MHC II类分子表达23.5%。荧光实验结果显示,CTP介导的肽段转导效率在肽段浓度为10 μmol/L、转导时间30 min是最有效;且CTP介导的抗原肽段在胞质中有良好的定位效能。CTP介导的抗原负载DC与T细胞共培养后,上清液IL-2水平随着抗原浓度增加而增加,最高浓度可达230 ng/L,表明已刺激DC的抗原交叉递呈反应。CCK8实验显示实验组和对照组DC存活率无明显差异,说明CTP无细胞毒性。体外实验表明实验组活化的T细胞分泌IFNγ以及TNFα的能力明显高于对照组,Elispot板上斑点可达167个以上;且实验组T细胞在抗原的刺激下,增殖明显。T细胞活化标志CD69、CD137表达量分别达到72.9%和28.3%,明显高于对照组。晚期T细胞脱颗粒标志CD107a在实验组表达增加明显,达到68.5%。细胞杀伤实验也表现出更优于对照组的能力,在效靶比为50:1的条件下,细胞溶解效率为40%以上,表明CTP介导的抗原负载能更好的刺激CML特异性CTL免疫应答。体内实验也显示出良好的免疫治疗效应,实验组裸鼠肿瘤明显小于对照组,生存期明显延长。. 本课题为CML的治疗提供了新的思路,且约1/3的急性淋巴细胞白血病患者亦表达BCR-ABL融合蛋白,该方法对其免疫治疗亦有重要意义。大多数白血病的发生与各种融合基因有关,该抗原负载方法策略对各类型白血病免疫治疗亦有重要的指导意义。
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DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-2727.2018.04.012
发表时间:2018-04-14
期刊:Zhonghua xue ye xue za zhi = Zhonghua xueyexue zazhi
影响因子:--
作者:Huang Y;Zhang P;Du L;Gui M;Feng WL;Peng Z
通讯作者:Peng Z
DOI:DOI:10.3760/cmaj.issn.0253—2727.2018.04.012
发表时间:2018
期刊:中华血液学杂志
影响因子:--
作者:黄勇;张萍;杜莉;桂敏;冯文莉;彭智
通讯作者:彭智
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