D-型氨基酸氧化酶（DAAO）是一种以黄素腺嘌呤二核苷酸为辅基的经典黄素酶，在中枢神经系统包括脊髓有特异性分布。.本项目选用一系列新颖高活性且结构与苯甲酸钠不同的DAAO抑制剂(AS057278, CBIO，NPCA，Compound 2和Compound 8等) 和RNA干扰基因沉默技术（siRNA/DAAO），在大鼠福尔马林和神经源性疼痛模型上研究脊髓DAAO基因表达和DAAO酶活性与神经源性疼痛和超敏痛发生发展的关系，并进行量效关系和相关性分析。研究发现福尔马林二相疼痛时，脊髓过氧化氢量显著增高，且能被fluorocitrate拮抗，系统给予DAAO抑制剂CBIO可剂量依赖性抑制福尔马林二相疼痛。ROS scavenger PBN可抑制福尔马林二相疼痛时的脊髓过氧化氢量增高，并抑制福尔马林二相疼痛。多次鞘内注射DAAO siRNA PEI混合剂或者注射表达DAAO shRNA的腺病毒均可以抑制大鼠福尔马林第二相疼痛，而对一相疼痛无影响。在大鼠骨癌痛模型中，DAAO基因表达以及DAAO酶活性较正常大鼠有显著增高，且同时伴有脊髓胶质细胞活化。使用DAAO抑制剂CBIO以及DAAO siRNA 鞘内注射可显著减轻大鼠的骨癌痛，皮下注射CBIO可抑制脊髓过氧化氢的生成和胶质细胞活化标志GFAP的表达。 此外，研究还发现，多次注射CBIO不产生自身疼痛耐受，以及和吗啡的交叉耐受。此外本研究对DAAO参与介导吗啡镇痛耐受中的作用以及其机制进行研究，皮下或脊髓联合给予吗啡和一系列结构不同的DAAO抑制剂如CBIO、AS057278和苯甲酸钠，在小鼠/大鼠急性疼痛(热板、甩尾)和福尔马林疼痛模型(第I相急性疼痛和第II相中枢敏感化疼痛)能完全预防吗啡对镇痛的耐受作用，单次剂量可完全逆转已形成的吗啡耐受状态，且DAAO抑制剂预防和逆转吗啡镇痛耐受作用与脊髓DAAO活性抑制成正性相关；脊髓注射siRNA/DAAO完全预防吗啡耐受；吗啡疼痛耐受形成后，脊髓过氧化氢升高15.1%；同时脊髓给予ROS非特异性清除剂PBN亦可完全阻断福尔马林II相疼痛和吗啡镇痛耐受状态。.本项目研究在细胞和动物水平上进一步证实脊髓DAO是治疗慢性疼痛包括神经源性疼痛的新的潜在靶点分子，为研发新型的治疗慢性疼痛药物提供药理学和生物学基础。