SYG61v是鹅胚传代致弱的GPV疫苗株，该课题的研究目标是以构建GPV强弱毒株的感染性质粒克隆为基础，通过差异片段交换和定点突变方法，探索对SYG61v株毒力减弱起决定性影响的关键蛋白、氨基酸位点或碱基。.我们先后测定了SYG61v疫苗株和LH、YZ99-6强毒株的全基因组序列。对SYG61v与5个分离于不同年代的GPV强毒株，在编码蛋白氨基酸序列及非编码调控区序列进行了比对。在VP1和Rep1蛋白，SYG61v分别产生了11个和10个氨基酸突变。Rep1的7个突变位点均处于Rep蛋白羧基端的100个氨基酸范围内。VP1蛋白的突变氨基酸位点分别为N49S，Q116R，P143S，V144I，A149V，S178T，N265T，F476L，H637Y，T672S，V718I，其中4个氨基酸突变处于VP1蛋白N端独特区，2个氨基酸突变存在于VP2蛋白氨基端，在VP3蛋白中存在5个突变位点。在这些突变氨基酸中，仅有1个位点（F476L）处于病毒衣壳外表面。在左侧ITR与P9启动子之间非编码区，存在两处共7个碱基的连续碱基突变。以SYG61v疫苗株和强毒株LH 为代表，分别构建了含有其全基因组的质粒pSYG和pLH，并建立了通过绒毛尿囊膜途径转染质粒拯救感染性病毒的高效方法，通过在拯救病毒中引入点突变以区分于亲本病毒，研究表明拯救病毒与其亲本病毒具有相似的生物学特性。.以pSYG和pLH质粒为基础，通过重叠PCR方法，在pSYG和pLH质粒之间互换Rep1和VP1基因片段，获得了嵌合病毒。雏鹅攻毒试验表明，携带强毒株VP1基因的pSYG-vRC、pSYG-vVP1和pLH-aRep1三个嵌合病毒对雏鹅表现出明显致病性，死亡率在75%~87.5%之间。完全携带弱毒株rep-cap编码框的pLH-aRC病毒攻毒组雏鹅无一死亡。携带强毒株Rep1基因的pLH-aVP1和pSYG-vRep1病毒攻毒组雏鹅无一死亡，但在试验期内部分雏鹅生长迟缓。嵌合病毒攻毒试验结果表明结构蛋白VP1基因的氨基酸点突变对SYG61v株的毒力减弱起着关键作用，而Rep蛋白点突变对毒力的转变也发挥有影响，但它的重要程度与VP1 蛋白相比明显处于次要地位。