MS2茎环在含长片段RNA病毒样颗粒表达中的作用研究

本研究拟以HIV-1 pol和gag区等长片段RNA为例，探讨MS2噬菌体RNA中的19mer茎环结构（包装位点）在外源长片段RNA包装入MS2包膜蛋白中并形成耐RNase病毒样颗粒中的作用机制。在采用PCR定点突变将茎环结构上-5位的U变为C，使得其与MS2包膜蛋白的相互作用的亲和力提高的基础上，再改变该茎环结构在外源拟包装RNA中的位置和数量，通过构建单质粒双表达系统，原核和真核表达内含上述外源RNA的病毒样颗粒，从而建立全新的可表达内含长片段RNA（大于3.0kb）的耐RNase的病毒样颗粒的平台，并得到含长的HIV-1pol区的片段（约3.0kb）和gag区（约1.5kb）RNA病毒样颗粒，并尝试用于HIV-1 mRNA疫苗、新型标准品和质控品的研究。本研究将为构建和表达内含特定长片段外源RNA序列的病毒样颗粒提供基础平台，在RNA疫苗和病毒核酸检测上具有重要理论和应用价值。