表达转导肽且内含siRNA重组噬菌体颗粒构建及HCV干扰研究

采用分子克隆和原核表达技术，以MS2噬菌体衣壳蛋白对包装位点的特异识别为基本原理，通过双质粒表达系统（一个质粒表达MS2的成熟酶蛋白和衣壳蛋白，另一个质粒用于构建siRNA）重组构建一种新型的噬菌体样颗粒，使其衣壳蛋白内包裹siRNA，从而使siRNA具有一定的RNA酶抗性，能够在细胞内外保持稳定。衣壳蛋白的环状结构内可以表达一段多肽而不会影响MS2噬菌体衣壳蛋白的结构与组装功能，又能使多肽保持相应的空间构象。在本研究中我们在衣壳蛋白的环状结构内表达一段转导肽，从而将siRNA导入稳定转染HCV复制子的Huh-7细胞中，观察siRNA对HCV复制的干扰作用，为HCV的基因治疗提供新的佐证；建立全新的siRNA的制备方法，为制备抗RNA酶的siRNA提供了新的思路；创立与以往转运体系不同的siRNA转运方法，增加了siRNA的导入途径，为siRNA的研究提供了新的方法。