RhoA/ROCK通路在EPO促视网膜神经细胞轴突生长中的作用

许多眼科疾病（如青光眼、缺血性视神经病变、视网膜变性及外伤等）可导致视网膜神经细胞的损伤和死亡，从而引起永久性视功能障碍。由于成熟视网膜神经细胞高度分化，正常情况下受损死亡的神经细胞不能再生，因此促进濒临死亡的视网膜神经细胞的存活及其轴突再生，提高它们对损伤的耐受能力已成为当今国内外神经保护的研究热点，也是眼科临床迫切需要解决的问题。本研究采用上丘逆行标记成年大鼠视网膜神经节细胞后，进行球后视神经压碎损伤在体实验和谷氨酸毒性作用下视网膜培养离体实验，应用视网膜铺片、免疫组化、RT-PCR及Western blot等方法，研究了促红细胞生成素(EPO)促进受损的视网膜神经细胞轴突生长的情况、轴突生长相关蛋白-43(GAP-43)及活性RhoA、总RhoA、Rho相关激酶(ROCK1和ROCK2)的表达变化情况；同时研究了ROCK抑制剂Y-27632对EPO促进视网膜神经细胞轴突生长及对活性RhoA、总RhoA、ROCK1和ROCK2表达的影响。主要研究结果显示：（1）EPO和ROCK抑制剂Y-27632均能促进中度视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞（RGCs）的存活；（2）EPO和Y-27632均能促进大鼠中度视神经钳夹伤后RGCs轴突通过钳夹伤处生长，且EPO和Y-27632联合用药对RGCs轴突生长具有协同作用；（3）EPO和Y-27632能下调中度视神经钳夹伤后视网膜中活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表达，且两药联合应用有协同作用，但对视网膜中总RhoA表达无影响；（4）谷氨酸能增加培养的视网膜中活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表达； EPO能下调谷氨酸毒性作用下培养的视网膜活性RhoA、ROCK1和ROCK2的表达。以上研究结果提示：在视神经损伤后，RhoA/ROCK通路被激活，并参与了调控RGCs存活和轴突生长的过程，它是一种负向调节机制；抑制活性RhoA，进而抑制其下游物质ROCK1和ROCK2的活化，从而抑制RhoA/ROCK通路信号传导，是EPO促进RGCs轴突生长的机制之一。本研究为发掘促进神经细胞轴突生长的药物和治疗靶点提供了实验依据，同时为神经损伤的修复治疗提供了理论依据和实验基础。