小菜蛾Spatzle和Dorsal基因对抗菌肽表达调控的机理研究
结题报告
批准号:
31071734
项目类别:
面上项目
资助金额:
35.0 万元
负责人:
金丰良
依托单位:
学科分类:
C1406.生物防治
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
赵志常、初志战、孙强、李林妙、高钢、黄婉君
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
客服二维码
微信扫码咨询
中文摘要
昆虫抗菌肽是体内一种具有广谱抗菌作用的小分子多肽,其表达受Toll/NF-кB信号途径的调控。本项目拟以小菜蛾为实验材料,运用同源克隆结合RACE技术克隆小菜蛾Toll信号通路中的Spatzle(Spz)和Dorsal(Dor)基因,运用RNAi抑制Spz和Dor基因的表达,阻断或减弱小菜蛾抗菌肽产生的信号传导,使小菜蛾更易感染病菌而死亡,以期为通过调控害虫免疫系统的开启来控制害虫奠定基础;运用定量RT-PCR、Northern印迹等方法检测Spz及Dor阻断前后抗菌肽基因的表达谱,阐明Spz和Dor在小菜蛾免疫应答信号传导中的功能;采用SSH文库筛选免疫的健康小菜蛾和RNAi抑制小菜蛾虫体的抗菌肽cDNA序列,以期获得小菜蛾体内新的抗菌肽基因。该项目运用了靶标特异性强的RNAi技术,避免了环境污染,为小菜蛾的综合防治提供了一种新的手段,并为新的抗菌肽基因的筛选开辟新的思路。
英文摘要
1、.为了更好的挖掘小菜蛾体内的免疫相关基因,本项目测定了实验室敏感型小菜蛾和田间小菜蛾的转录组,综合筛选到725条与免疫相关的Unigene序列;其中Spatzle序列3条,Dorsal序列2条。 在此序列的基础上,利用RT-PCR和RACE克隆了小菜蛾Spatzle(KF960052)和Dorsal(KF960046)基因的cDNA全长和相关抗菌肽基因的cDNA全长,模式识别蛋白基因的cDNA全长,为研究Spatzle和Dorsal基因对抗菌肽的调控提供了靶标基因。.2、.为了更好探讨小菜蛾Spatzle(PxSpa)和Dorsal(PxDor)的结构和功能。在原核细胞中表达了Spatzle和Dorsal,并制备了多克隆抗血清。为了研究Spatzle的功能,在果蝇S2细胞中表达了Spatzle的功能区C-108个氨基酸(PxSpa-C108)和PxDor,利用His-taq一步纯化了重组的PxSpa-C108 和PxDor。利用制备的PxSpa-C108蛋白和抗PxSpa血清分别注射小菜蛾,结果表明在注射PxSpa-C108蛋白的血淋巴中的杀菌活性明显高于注射抗PxSpa血清的杀菌活性;同时注射PxSpa-C108蛋白的血淋巴中的细菌的存活率明显低于注射抗PxSpa血清的血淋巴中的细菌存活率;结果表明PxSpa在启动抗菌肽表达过程中起着重要作用;而注射PxDor蛋白并没有增强血淋巴的杀菌活性。.3、.利用RNAi阻断了PxSpa 的表达,荧光定量PRC检测表明,PxSpa 表达沉默后,PxDor基因的表达明显下降,抗菌肽基因Cecropin1,Cecropin2,Cecropin3,Gloverin,Defensin和Lysozyme1的表达明显降低,而且,RNAi阻断了PxSpa的表达后的血淋巴中的细菌M15存活率明显升高。RNAi阻断了PxDor的表达,也同样降低了以上抗菌肽的表达,结果表明PxSpa和PxDor在小菜蛾抗菌肽表达过程中起调控作用。进一步研究表明,PxSpa基因的沉默,提高了玫烟色棒束孢对小菜蛾的致病能力。.4、.通过以上研究,挖掘了小菜蛾免疫相关基因,明确了PxSpa和PxDor在小菜蛾抗菌肽表达中起着重要功能;发表文章4篇,其中SCI文章一篇;投稿文章(SCI)3篇;申请专利6个。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Toxicity of Proteins Secreted by Entomopathogenic Fungi against Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae)
昆虫病原真菌分泌的蛋白质对小菜蛾(鳞翅目:小菜蛾科)的毒性
DOI:--
发表时间:2012
期刊:International Journal of Agriculture and Biology
影响因子:--
作者:Freed, Shoaib;Jin Feng-Liang;Naeem, Muhammad;Ren Shun-Xiang;Hussian, Mubshar
通讯作者:Hussian, Mubshar
Molecular characterization of a short peptidoglycan recognition protein (PGRP-S) from Asian corn borer (Ostrinia furnacalis) and its role in triggering proPO activity
亚洲玉米螟 (Ostriniafurnacalis) 短肽聚糖识别蛋白 (PGRP-S) 的分子特征及其在触发 proPO 活性中的作用
DOI:10.1007/s11274-013-1449-3
发表时间:2013-08
期刊:World Journal of Microbiology and Biotechnology
影响因子:4.1
作者:Qiang Sun;Xiao-Xia Xu;Shoaib Freed;Wan-Jun Huang;Feng-Liang jin
通讯作者:Feng-Liang jin
DOI:10.1007/s11274-010-0466-8
发表时间:2011-02-01
期刊:WORLD JOURNAL OF MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY
影响因子:4.1
作者:Freed, Shoaib;Jin, Feng-Liang;Ren, Shun-Xiang
通讯作者:Ren, Shun-Xiang
DOI:--
发表时间:2011
期刊:Acta Entomologica Sinica
影响因子:--
作者:孟翔;胡俊杰;金丰良;任顺祥
通讯作者:任顺祥
DOI:10.1016/j.pep.2012.08.006
发表时间:2012-10-01
期刊:PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION
影响因子:1.6
作者:Jin, Fengliang;Sun, Qiang;Ren, Shunxiang
通讯作者:Ren, Shunxiang
miR-308-3p靶向PGRP-LB调控小菜蛾抗菌肽表达的分子机制
  • 批准号:
    31972345
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    58.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    金丰良
  • 依托单位:
miR-276-3P靶向PxβGRP1和PxβGRP2介导小菜蛾免疫虫生真菌的分子机制
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    10.0万元
  • 批准年份:
    2019
  • 负责人:
    金丰良
  • 依托单位:
小菜蛾免疫防御虫生真菌侵染的分子机制
  • 批准号:
    31572069
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    58.0万元
  • 批准年份:
    2015
  • 负责人:
    金丰良
  • 依托单位:
基于小菜蛾抗菌肽表达调控的MicroRNAs及其功能研究
  • 批准号:
    31371989
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    80.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    金丰良
  • 依托单位:
家蝇Toll受体模式及其对抗微生物肽表达调控的机理研究
  • 批准号:
    30800718
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    22.0万元
  • 批准年份:
    2008
  • 负责人:
    金丰良
  • 依托单位:
国内基金
海外基金