甲胎蛋白与caspase信号轴分子的选择性识别及其抗凋亡诱导的作用机制

按照项目计划书的要求，开展项目指标的研究，不仅完成项目研究的全部指标，而且还扩展和深入项目的研究内容。在前期研究时，我们发现，甲胎蛋白（AFP）能选择性与caspases信号轴的caspase-3结合，抑制caspases的信号传递，从而导致人肝癌细胞耐受肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导凋亡。本项目还开展肝癌细胞内AFP与维甲酸受体-beta（RAR-beta）相互作用的研究。运用免疫共沉淀（Co-IP）技术分析AFP与RAR-beta的相互结合情况；采用激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-beta在肝癌细胞内的共定位状况，以及荧光共振能量转移（FRET）技术研究AFP与RAR-beta相互作用，并观察全反式维甲酸作用于肝癌细胞后AFP对凋亡信号分子caspase-3的迁移影响；运用RNA干扰技术分析干扰AFP表达后肝癌细胞对全反式维甲酸的敏感性以及采用染色体免疫共沉淀技术（ChIP）研究RAR-beta对肝癌细胞存活基因survivin转录调节的影响。研究结果显示AFP能与RAR-beta相互作用并抑制RAR-beta的转录调节功能，同时也发现AFP具有抑制caspase-3的活性和向核内迁移的特性。在研究过程中，还发现AFP通过抑制PTEN的活性激活PI3K/AKT信号促进AKT（Ser473）的磷酸化，导致CXCR4的表达。该项目研究有以下发现：（1）AFP能抑制caspase-3传递凋亡信号；（2）AFP具有抑制RAR-beta的转录调节功能；（3）AFP具有促进PI3K/AKT信号传递的生物学功能。所以项目研究提示AFP具有信息调控分子样作用的生物学功能。项目研究结果共发表学术论文16篇，其中SCI论文6篇，获得海南省高等学校优秀科技成果一等奖1项。