microRNA介导LCRG1基因转录后调控及其机制研究

Laryngeal Carcinoma Related Gene 1(LCRG1)是一个喉癌候选抑瘤基因，其转录调控机制不清。应用生物信息学结合喉癌组织miRNAs表达芯片结果推测miR-21-5p，miR-181d，miR-193b-3p，miR-222-3p，miR-1264可能参与LCRG1基因表达调控， miR-21-5p，miR-181d，miR-1264，在28例喉癌组织表达上调且有统计学意义(P<0.05)，miR-222-3p，miR-193b-3p虽然在喉癌组织里显示上调，但没有统计学意义(P>0.05)。荧光素酶报告基因结果提示:miR-21-5p，miR-181d，miR-1264参与调控LCRG1基因的表达。miR-21-5p与LCRG1 3’UTR的第一个结合位点的野生型能使荧光素酶的活性显著性降低（P<0.05），突变体无显著性降低，表明第一个结合位点为其结合位点。上调miR-21-5p可抑制LCRG1蛋白水平的表达，而下调miR-21-5p可促进LCRG1蛋白水平的表达。上调miR-21-5p抑制LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强，而下调miR-21-5p促进LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱。miR-181d与LCRG1 3’UTR的第一个结合位点的野生型能使荧光素酶的活性显著性降低（P<0.05），突变体无显著性降低，表明第一个结合位点为其结合位点。上调miR-181d可抑制LCRG1蛋白水平的表达，而下调miR-181d可促进LCRG1蛋白水平的表达。上调miR-181d抑制LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强，而下调miR-181d促进LCRG1的表达使Hep2细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱。上调miR-1264不能抑制LCRG1蛋白水平的表达，而下调miR-1264不促进LCRG1蛋白水平的表达。从喉癌标本库中选取LCRG1蛋白表达下调50例喉癌组织，采用 Real-time RT-PCR技术，检测喉癌组织中miR-21-5p，miR-181d，miR-1264表达水平，比较分析miRNAs分子表达与LCRG1表达，结果提示。miR-21-5p，miR-181d与LCRG1的表达呈负相关（P<0.05）。而miR-1264与LCRG1的表达无显著性相关。