共轭亚油酸致低乳脂综合症分子机理的研究

本项目研究了纯品c9,t11 CLA和t10,c12 CLA导致奶牛低乳脂综合征的分子机理。试验采用组织块法体外分离鉴定奶牛乳腺上皮细胞，用0、50、100和150μM的CLA作用于乳腺上皮细胞，采用MTT法检测细胞存活率，用显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡情况，用QRT-PCR定量测定乳腺上皮细胞脂肪合成相关基因mRNA的转录水平。研究结果表明：体外培养的乳腺商品细胞具有典型的上皮特性，角蛋白18检测为阴性，细胞生长曲线呈“S”型，细胞群体倍增时间为32.18h；两种高浓度（150μM）的CLA均抑制细胞增殖、促进细胞凋亡；50μM的c9,t11 CLA显著抑制乳腺上皮细胞ACC、FAS、D5去饱和酶和D6去饱和酶基因mRNA的转录水平（P＜0.05），而150μM却显著促进上述酶基因mRNA的转录水平（P＜0.05）；50μM的t10,c12 CLA显著促进ACC、SCD5、D5和D6酶mRNA的转录水平（P＜0.05），但对FAS无影响，在150μM时，上述酶基因mRNA转录均显著抑制（P＜0.05）；不同浓度的两种CLA均显著抑制SCD1转录水平，但显著促进SCD5的转录水平（150μM t10, c12 CLA除外）；c9,t11 CLA显著提升细胞中SCD指数（P＜0.05），而t10,c12 CLA则显著降低SCD指数（P＜0.05）；50-150μM的两种CLA均显著降低LPL基因mRNA转录水平（P＜0.05）；50μM的c9, t11 CLA显著降低CD36基因mRNA的转录水平（P＜0.05），而150μM的c9,t11 CLA却增加其转录水平（P＜0.05），CD36 mRNA的转录水平随t10,c12-CLA浓度增加呈显著上升趋势（P＜0.05）；150μM c9,t11 CLA可显著增加ACBP的转录水平（P＜0.05），t10,c12 CLA增加ACBP mRNA转录水平；两种CLA均显著降低FABP3基因mRNA的转录水平（P＜0.05），150μM的两种CLA都显著提升AGPAT的转录水平（P＜0.05）；两种CLA均降低乳腺上皮细胞内甘油三酯含量。由此可见CLA导致低乳脂综合征不仅与其抑制乳腺细胞增值有关，而且与脂肪酸合成、甘油三酯合成、脂肪酸转运关键酶的基因表达有关。本研究结果为将来实现调控乳腺脂肪合成提供理论依据和技术支撑。