利用DNA改组技术优化真菌免疫调节蛋白基因

选用灵芝属真菌赤灵芝、松杉灵芝、紫芝以及金针菇属金针菇、小包脚菇属草菇为材料，以真菌免疫调节蛋白基因序列为基础，利用DNA shuffling技术对其基因进行重排，并结合噬菌体表面呈现技术构建噬菌体真菌免疫调节蛋白基因突变体文库。采用磁株偶联抗体技术，对突变体库进行富集。通过免疫活性测定对富集得到的克隆进行二轮筛选，最终获得免疫活性提高的真菌免疫调节蛋白的突变体。将此突变体克隆至原核表达载体，转化表达菌株，纯化出免疫调节活性明显提高的突变体蛋白。对免疫活性提高的突变体进行基因的全序列测定，分析发生突变的位点，研究一级结构中氨基酸组成的改变对免疫调节活性的影响，分析真菌免疫调节蛋白结构和功能的关系。本研究利用DNA shuffling技术对属内和属间进行基因重排，优化真菌免疫调节蛋白基因，筛选具有高效免疫调节活性的新型真菌免疫调节蛋白，具有重要的理论意义和科学价值。