生防链霉菌Men-myco-93-63中nsdB等调控基因的克隆及功能验证

批准号:
31171894
项目类别:
面上项目
资助金额:
62.0 万元
负责人:
李亚宁
依托单位:
学科分类:
C1406.生物防治
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
孟庆芳、何丽明、冀红柳、李爱霞、杨淑
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中文摘要
玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63是一株很有生防应用潜力的链霉菌,该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、瓜类白粉病菌、番茄灰霉病菌等多种农业生产上重要的植物病原菌都表现出很强的拮抗作用,并且田间防效良好。我们已建立起该菌株的遗传转化体系,并从中克隆和验证了一个负调控基因- - nsdA基因的全长和功能。在此基础上,本项目将根据模式链霉菌中的nsdB、rrdA、tcrA、afsR等负、正调控基因的保守序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组,克隆该菌株中的调控序列,并通过基因阻断和转化试验来验证这些调控基因在该生防菌中的功能,为探明玫瑰黄链霉菌代谢途径及实现该生防菌的遗传改良奠定重要的基础。
英文摘要
玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63 是从马铃薯疮痂病自然衰退土壤中分离得到对棉花黄萎病菌表现强烈抑制作用的菌株。在室内及大田实验中,该菌株及其发酵液对棉花黄萎病菌、黄瓜白粉病菌、番茄灰霉病菌等十几种植物病原菌表现出较强的抑制作用,在植物病害生物防治方面表现出良好的开发应用潜力。根据检索到的天蓝色链霉菌中发现的全局性调控基因 nsdB 基因的序列设计引物,对 Men-myco-93-63 进行 PCR 扩增,获得 1121 bp 的片段,以该片段为靶序列,设计引物利用非特异引物锚定 PCR(NPA-PCR)方法对其两端进行延伸,拼接后得到 2073 bp 的全长序列。全长序列包含一个完整的开放阅读框,编码 464 个氨基酸,与天蓝色链霉菌 A3(2) 中 nsdB 基因核苷酸序列有 87 % 同源性,将此全长基因命名为 nsdBmgh。经 Southern 杂交验证,该基因在 Men-myco-93-63 基因组中确实存在,且为单拷贝。用基因破坏型质粒 pKC1139 构建单交换载体 pSRNA1121(pKC1139::1121bp nsdBmgh)来阻断该负调控基因,通过转化 ET12567(pUZ8002)获得接合转移供体菌 ET12567(pUZ8002,pSRNA1121),利用接合转移将其导入玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 中,得到了基因中断突变株。根据天蓝色链霉菌 A3(2) 中 rrdA 基因(regulator of redD)序列设计引物,对Men-myco-93-63 进行扩增获得 393 bp 的片段,再经全长序列扩增引物 rrdA–1 和 rrdA–2 克隆到该基因的全长序列 809 bp,包含一个完整的开放阅读框,共编码 221 个氨基酸,与目的基因核苷酸序列同源性为80 %,命名为 rrdAmgh。根据天蓝色链霉菌 A3(2) 中的其他三个正、负调控基因tcrA、sarA 和 scrX 序列设计引物,对Men-myco-93-63 进行扩增,分别获得 705 bp、1472 bp 和 473 bp 的片段,与目的基因核苷酸序列同源性均为 99 %,推测 Men-myco-93-63 中也可能含有这三个调控基因。发表相关学术论文 14 篇,获得国家发明专利 2项。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2013
期刊:河南农业科学
影响因子:--
作者:胡亚亚;沈凤英;李亚宁;刘大群
通讯作者:刘大群
DOI:--
发表时间:2011
期刊:湖南农业科学
影响因子:--
作者:孟庆芳;冯丽娜;张汀;刘大群
通讯作者:刘大群
DOI:--
发表时间:2015
期刊:中国植保导刊
影响因子:--
作者:张艳杰;沈凤英;李亚宁;刘大群
通讯作者:刘大群
DOI:--
发表时间:2014
期刊:中国蔬菜
影响因子:--
作者:沈凤英;李珍珍;李亚宁;刘大群
通讯作者:刘大群
DOI:--
发表时间:2013
期刊:河南农业科学
影响因子:--
作者:孟庆芳;张汀;刘大群;赤国彤
通讯作者:赤国彤
双组分系统SRO293/294在玫瑰黄链霉菌拮抗疫霉中的调控作用及其机制
- 批准号:--
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:54万元
- 批准年份:2022
- 负责人:李亚宁
- 依托单位:
玫瑰黄链霉菌抑菌活性代谢产物roflamycoin的生物合成及调控研究
- 批准号:31972316
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:59.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:李亚宁
- 依托单位:
我国葡萄灰霉病菌种内多样性及其生物防治
- 批准号:31572050
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:68.0万元
- 批准年份:2015
- 负责人:李亚宁
- 依托单位:
生防链霉菌Men-myco-93-63遗传转化体系及其调控序列的研究
- 批准号:30800734
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:24.0万元
- 批准年份:2008
- 负责人:李亚宁
- 依托单位:
国内基金
海外基金
