松材线虫食道腺细胞特异表达的寄生致病相关基因的分离鉴定及功能分析

松材线虫是松材线虫病的病原，松树感病后2～3 月死亡，造成了林业经济、森林生态的巨大损失，迄今致病机理不清楚，也无有效防治方法。研究表明食道腺分泌物是线虫寄生致病关键物质，目前仅从松材线虫食道腺分离到纤维素酶和葡聚糖内切酶基因，尚未对其寄生致病基因进行系统全面的分离和功能分析。本研究利用显微微吸技术直接获取该线虫食道腺和肠道细胞的微量细胞质和mRNA，克服用整条线虫掩盖食道腺低丰度的mRNA导致不能获得更多基因的弊端；利用固相扣除杂交技术快速高效构建食道腺特异表达cDNA文库，对文库进行序列和同源性分析，利用原位杂交技术确定基因表达部位和时期，采用RNAi等技术研究新基因的功能。试验将获得大量具原创性、与松材线虫寄生致病相关的基因并初步明确部分基因的功能，结果将为解析松材线虫寄生致病机制和病害防治提供理论依据，为研究迁移性内寄生线虫同类基因提供范例，并将进一步丰富植物线虫寄生致病基因库。