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长链非编码RNA-SNHG3作为ceRNA参与miR-885-5p调控人牙髓干细胞成牙本质样分化中DSPP基因的机制研究

批准号:
81870755
项目类别:
面上项目
资助金额:
57.0 万元
负责人:
吴补领
依托单位:
学科分类:
牙体牙髓及根尖周组织疾病
结题年份:
2022
批准年份:
2018
项目状态:
已结题
项目参与者:
邵军、闫文娟、李建嘉、陈婷、陈明、彭玲、刘斐、李心竹

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项目成果

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中文摘要
人牙髓干细胞(hDPSCs形成成牙本质样细胞的能力在牙髓损伤再生机制中具有重要意义,且牙本质涎磷蛋白(DSPP)作为检测成牙本质向分化的特异性标记物之一,其调控机制备受关注。芯片结果及验证发现hDPSCs在成牙本质样分化14天时长链非编码RNA-SNHG3显著上调,数据库和基因报告分析发现SNHG3与miR-885-5p存在作用位点,并且荧光素酶报告显示下调表达的miR-885-5p对DSPP存在调控作用。据此推测SNHG3通过吸附miR-885-5p参与对DSPP的调控。本课题拟构建SNHG3和miR-885-5p过/抑制表达的稳定细胞系以分析功能;观察SNHG3的细胞内定位,明确其调控机制;进一步探索SNHG3通过吸附miR-885-5p调控DSPP参与的调控机制。研究旨在阐明SNHG3调控hDPSCs成牙本质样分化的功能及机制,为牙髓再生提供新思路。
英文摘要
Attributed to the capacity of differentiation into odontoblast-like cells, human dental pulp stem cells (hDPSCs) function as crucial roles in repairment mechanism in dental pulp impairment. As a specific gene of odontoblast differentiation, dentin sialophosphoprotein (DSPP) has been a research hot spot. Microarray analysis and validation results have revealed significant up-regulation of long non-coding RNA-SNHG3 (lncRNA-SNHG3) in hDPSCs when induced into odontoblast at day 14. Based on the binding site prediction of lncRNA-SNHG3 and miR-885-5p and demonstration of negative regulatory effect of miR-885-5p on DSPP by dual-luciferase reporter assay, we propose that lncRNA-SNHG3 may regulate expression of DSPP by sponging miR-885-5p. In this study, we constructed hDPSC cell lines persistently over-/under-expressing lncRNA-SNHG3 or miR-885-5p for analysis of their functions in odontoblast differentiation of hDPSCs. Further, through detection of localization of lncRNA-SNHG3 in hDPSC, we investigate the mechanism of lncRNA-SNHG3 in regulating DSPP via miR-885-5p. This study aims to illuminate the function of lncRNA-SNHG3 in regulating odontoblast differentiation of hDPSCs to provide novel ideas for dental pulp regeneration.
牙髓炎是口腔临床上最常见的疾病,但一旦牙髓组织受感染后很难恢复,往往采用去髓术结合根管治疗术,以达到消除感染、保留患牙的目的。但失去牙髓的牙齿由于失去了营养的支持,极易出现折断、变色等并发症。因此,尽可能的保存活髓,促进牙髓组织的再生具有重要的意义。人牙髓干细胞 (hDPSCs) 作为牙组织工程的种子细胞之一,也是迄今为止在牙髓再生研究中得到最多应用的种子细胞。hDPSCs在牙髓组织损伤时能分化为成牙本质样细胞形成修复性牙本质,因此成牙本质样细胞的形成在牙髓损伤再生机制中具有重要意义;而牙本质涎磷蛋白(DSPP)是由成牙本质样细胞分泌的,被认为是检测成牙本质向分化的特异性标记物,其调控机制备受关注。因此,该研究对hDPSCs分化过程中调控DSPP的关键lncRNA及机制进行了探究。首先,采用了人转录基因组芯片检测及体外细胞验证实验发现:hDPSCs在成牙本质样分化14天时长链非编码RNA-SNHG3显著上调,数据库和基因报告分析发现lncRNA-SNHG3与miR-885-5p存在作用位点,并且荧光素酶报告显示下调表达的miR-885-5p对DSPP存在调控作用。体外细胞功能实验、裸鼠体内构建的人牙齿空根管模型牙髓再生的动物模型实验,均验证了miR-885-5p抑制hDPSCs成牙本质及成血管分化。据此后续进行机制探究:荧光原位杂交技术发现lncRNA-SNGH3定位于包质内;荧光素酶报告系统检测与lncRNA-SNGH3结合和靶向DSPP的miRNA为miR-885-5p。最后,通过回复实验构建SNHG3和miR-885-5p过/抑制表达的稳定细胞系,进一步验证lncRNA-SNGH3通过吸附miR-885-5p调控DSPP表达。该课题深入探究hDPSCs的成牙本质样分化过程的具体机制,寻找参与分化过程的关键分子lncRNA-SNHG3及其作用靶点,为牙髓再生提供新思路的同时,也为构建组织工程牙髓-牙本质复合体提供实验研究的基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Studies on antimicrobial peptide-loaded nanomaterial for root caries restorations to inhibit periodontitis related pathogens in periodontitis care
牙周炎护理中载抗菌肽纳米材料用于根面龋修复抑制牙周炎相关病原体的研究
DOI: 10.1080/02652048.2020.1842528
发表时间: 2020-11
期刊: JOURNAL OF MICROENCAPSULATION
影响因子: 3.9
作者: [Hu Yuqian, Chen Yan, Lin Lijuan, Zhang Jinhui, Lan Rengang, Wu Buling]
通讯作者: Wu Buling
Dental pulp stem cells from human teeth with deep caries displayed an enhanced angiogenesis potential in vitro.
来自深龋人类牙齿的牙髓干细胞在体外表现出增强的血管生成潜力
DOI: 10.1016/j.jds.2020.03.007
发表时间: 2021-01
期刊: Journal of dental sciences
影响因子: 3.5
作者: [Chen Y, Li X, Wu J, Lu W, Xu W, Wu B]
通讯作者: Wu B
DOI: 10.3389/fcell.2021.661116
发表时间: 2021
期刊: Frontiers in cell and developmental biology
影响因子: 5.5
作者: [Deng Z, Yan W, Dai X, Chen M, Qu Q, Wu B, Zhao W]
通讯作者: Zhao W
Dynamic proteomic profiling of human periodontal ligament stem cells during osteogenic differentiation.
人牙周膜干细胞成骨分化过程中的动态蛋白质组学分析
DOI: 10.1186/s13287-020-02123-6
发表时间: 2021-02-03
期刊: Stem cell research & therapy
影响因子: 7.5
作者: [Li J, Wang Z, Huang X, Wang Z, Chen Z, Wang R, Chen Z, Liu W, Wu B, Fang F, Qiu W]
通讯作者: Qiu W
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    lnc-SYK-2/hnRNPK/VEGF新途径调控人牙髓干细胞成血管分化的机制研究
    • 批准号:
      --
    • 项目类别:
      面上项目
    • 资助金额:
      55万元
    • 批准年份:
      2021
    • 负责人:
      吴补领
    • 依托单位:
    整合素α5(Integrin-α5)对人牙髓干细胞成牙本质向分化的调控及作用机制研究
    • 批准号:
      81670986
    • 项目类别:
      面上项目
    • 资助金额:
      58.0万元
    • 批准年份:
      2016
    • 负责人:
      吴补领
    • 依托单位:
    miR-586和miR-98靶向调控牙本质基质蛋白1对牙髓干细胞定向分化为成牙本质细胞的影响及作用机制
    • 批准号:
      81371137
    • 项目类别:
      面上项目
    • 资助金额:
      70.0万元
    • 批准年份:
      2013
    • 负责人:
      吴补领
    • 依托单位:
    国内基金
    海外基金