蒙古族原发性高血压易感位点SLC12A3 Val793Met的功能研究

批准号:
81760080
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
34.0 万元
负责人:
安彩艳
依托单位:
学科分类:
H0213.血压调节异常与高血压病
结题年份:
2021
批准年份:
2017
项目状态:
已结题
项目参与者:
王羚鸿、张谦、李永东、陈树友、张志慧、袁梦露、侯丽娜
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中文摘要
高血压严重危害人类健康,尽管针对高血压的临床诊疗和基础研究不断取得进展,但绝大多数的高血压患者病因仍不明,严重阻碍了高血压精准治疗的发展。本项目前期工作中发现编码NCC蛋白的SLC12A3基因Val793Met突变为蒙古族高血压易感位点。但该位点在高血压发病中是否发挥功能目前未见报道。本项目拟:1、利用非洲爪蟾卵母细胞模型,通过构建SLC12A3野生型及Val793Met突变型载体,Western blot,激光共聚焦显微镜,22Na+吸收实验等方法检测Val793Met突变是否影响NCC蛋白量、膜定位或其Na+转运功能;2、在500~1000的随机人群中,采用Massarray,SDS-PAGE,LC-MS/MS等方法验证Val793Met突变率及携带该突变不同基因型的个体尿液中NCC氨基酸序列及表达量的差异。本项目的开展,为此类突变造成的高血压精准诊断试剂盒和治疗药物的开发提供新的靶点
英文摘要
Hypertension is a serious threat to human health. Although the clinical diagnosis, treatment and basic research of hypertension continue to make progress, but the etiology of the vast majority of patients with hypertension is still unknown. This seriously hampered the development of precision treatment of hypertension. Our previous study found that the Val793Met mutation of SLC12A3 gene, encoding NCC protein, was susceptible loci to hypertension in the Mongolian population. But whether Val793Met plays a functional role in the pathogenesis of hypertension has not being reported currently. In the present study, (1) The effects of Val793Met on the expression level, cell membrane localization and Na+ transport function of NCC protein in Xenopus laevis oocyte will be detected by Western blot, laser confocal microscopy, 22Na+ absorption assay with SLC12A3 wild type and Val793Met mutant vector; (2) The mutation rate of Val793Met, the difference of amino acid sequence and expression level of urine NCC will be verified by methods of Massarray, SDS-PAGE, LC-MS/MS, etc. in 500 ~ 1000 random Mongolian population. This study will provide a new target for the development of precision diagnostic kits and therapeutic drugs of hypertension caused by this mutation.
高血压是严重危害人类健康的慢性疾病。高血压的精准分子诊断及根据患者个体的分子生物学特征选择最有效的药物是当前医学中亟待解决的难题。本项目拟为高血压精准诊断试剂盒和新型药物的开发提供新的靶点。.本项目完成的主要研究内容和重要结果包括:.1.先后3次在内蒙古锡林郭勒盟和呼和浩特地区采集蒙古族高血压和正常人群的血液和尿液样本,各1824份;同时,收集每位受试者的个人信息、营养和运动信息等,并检测临床指标。信息条目390项,临床检测指标13项。.2.SLC12A3基因是临床上最常用的高血压治疗药物—噻嗪类利尿剂的作用靶点,编码NCC蛋白。我们利用非洲爪蟾卵母细胞模型,通过构建SLC12A3野生型和突变型质粒,测序验证突变体,体外转录,显微注射和激光共聚焦等实验技术,发现与野生型NCC蛋白相比,NCC Val793Met突变蛋白在细胞膜上的表达和定位显著增强。.3.超高速离心受试者尿液,并通过透射电镜观察证实超高速离心产物为尿外泌体。Western blot结果表明,蒙古族高血压患者尿外泌体NCC的表达显著高于正常人群。对包含77个蒙古族高血压患者和33个正常血压受试者的病例对照人群进行3D Label Free蛋白组测序,在高血压人群中鉴定出上调蛋白88个,下调蛋白65个。.4.筛选蒙古族高血压样本和正常对照样本共490例进行全外显子组测序(WES)。通过质控和排除具有亲缘关系的个体,最终入选高血压组235人,正常对照组100人。在genewise水平上(MAF < 0.01),两组间差异基因701个。.非洲爪蟾卵母细胞模型是研究离子通道的重要表达系统。本项目成功构建了爪蟾卵母细胞表达系统并解决了相关技术难题,为利用该表达系统开展离子通道相关研究奠定了技术基础。.本项目研究发现,Val793Met突变显著增强NCC在细胞膜上的表达和定位。但鉴于该突变在人群中的突变率相对较低,可能不适宜作为高血压精准诊断试剂盒的靶点。.在全外显子组测序和蛋白组测序结果的基础上,本课题组将深入探索SLC12A3基因的其它突变体和其它相关基因的突变,寻找高血压精准诊断试剂盒的最优靶点,开发分子检测试剂盒并应用于临床。
期刊论文列表
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DOI:--
发表时间:--
期刊:中华高血压杂志
影响因子:--
作者:王欣;李子超;安彩艳;方鑫
通讯作者:方鑫
Genetic variants of SLC12A3 modulate serum lipid profiles in a group of Mongolian pedigree population.
SLC12A3 的遗传变异调节一组蒙古族谱系人群的血清脂质谱。
DOI:10.1186/s12944-018-0737-1
发表时间:2018-04-16
期刊:Lipids in health and disease
影响因子:4.5
作者:An C;Liang J;Zhang K;Su X
通讯作者:Su X
Association between the ABCA1 (R219K) polymorphism and lipid profles: a meta‑analysis.
ABCA1 (R219K) 多态性与脂质谱之间的关联:荟萃分析。
DOI:--
发表时间:2021
期刊:Scientifc Reports
影响因子:--
作者:Zhangyan Shi;Yajie Tian;Ze Zhao;Yufei Wu;Xiuxia Hu;Junlin Li;Qianliang Chen;Yan Wang;Caiyan An;Kejin Zhang
通讯作者:Kejin Zhang
DOI:doi.org/10.1186/s12944-018-0737-1
发表时间:2018
期刊:Lipids in Health and Disease
影响因子:4.5
作者:Caiyan An;Junqing Liang;Kejin Zhang;Xiulan Su
通讯作者:Xiulan Su
一种新的质子感知Gq蛋白偶联受体的筛选及其鉴定
- 批准号:31960149
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:39.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:安彩艳
- 依托单位:
国内基金
海外基金
