硝基呋喃代谢物多价半抗原的抗体诱导及抗体与代谢物原型识别机制研究
批准号:
31271865
项目类别:
面上项目
资助金额:
88.0 万元
负责人:
孙远明
依托单位:
学科分类:
C2009.食品安全风险评估
结题年份:
2016
批准年份:
2012
项目状态:
已结题
项目参与者:
徐振林、肖治理、李美英、穆洪涛、吴璟、罗林
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中文摘要
抗生素在动物体内代谢产物的安全性已引起人们的广泛关注。多数代谢产物的分子量很低(一般<150 Da),国际上直接针对其代谢物原型的免疫检测尚未取得突破。本课题组前期制备了呋喃唑酮(硝基呋喃类药物中的一种)代谢产物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ,102 Da)的2价半抗原,与载体蛋白偶联后可以刺激动物产生特异性免疫应答。本项目拟在此基础上,合成硝基呋喃类药物代谢物的多价半抗原,探讨其诱导产生特异性识别代谢物抗体的能力,建立不同价数半抗原与抗体亲和力的关系模型,在获得抗体的基础上研究抗体与代谢物的反应特性及其识别机制,最终建立检测对象无需衍生化(即代谢物原型)的免疫检测方法。本项目的实施不但为直接检测硝基呋喃代谢产物原型提供新方法,而且为建立其他超低分子量有害物的免疫检测方法提供理论与技术基础,具有重要的意义。
英文摘要
The safety of antibiotics metabolites degraded in animal has raised public concerns. A lot of these metabolites are with low molecular weight (<150 Da); therefore the direct determination of these metabolites without derivatization using immunoassays is still unavailable. Previously, the hapten of 3-amino-2-oxazolidone (AOZ, 102Da), the main metabolite of furazolidone, was conjugated to the two amido of lysine to obtain a divalent hapten and then coupled to carrier protein as new immunogen. Antibodies specific to AOZ was obtained by using this new immunogen, while it failed to obtain specific antibodies to AOZ using the traditional immunogen (direct coupling AOZ hapten to carrier protein). Based on this interesting result, in this project, we intend to synthesize haptens against nitrofuran with multiple level using lysine as basal unit. The antibodies production ability induced by the multiple haptens will be studied. The relationship model between the multiple haptens and the antibodies affinity will be constructed. Based on the obtained antibodies, the specificity and recognition mechanism between the antibodies and nitrofuran metabolites will be studied. Finally, immunoassays without derivatization to determine nitrofuran metabolites will be developed. The results of this project will provide a new strategy on the production of antibodies with high affinity for haptens with super-low molecule weight.
本项目重点以硝基呋喃代谢物AMOZ和AOZ为对象,针对其分子量小、结构简单等特点,引入赖氨酸树状分子作为载体,研究其提高半抗原免疫原性的能力,主要的结果如下:(1)合成了系列半抗原,并以赖氨酸为基础单元合成了从2价到8价的树状分子,制备树状半抗原和树状抗原,通过动物免疫及抗血清鉴定,研究了不同价数半抗原的抗体诱导能力及其抗体活性,建立半抗原价数与抗体亲和力的关系模型。结果发现4价树状分子具有显著提高半抗原免疫原性的效果,与传统载体蛋白相比,其更有利于刺激动物免疫应答产生抗体,并基于此制备了特异性识别AMOZ的抗体;(2)制备了AMOZ特异性单克隆抗体,并建立了直接检测AMOZ的无需衍生化的免疫分析方法,半抑制浓度IC50值为20.7ng/mL,方法的检出限IC10为0.95ng/mL,检测范围为IC20~IC80:2.92ng/mL ~145.2ng/mL;同时建立了AMOZ和AOZ荧光偏振、量子点标记免疫层析试纸条等多种免疫分析方法,并进行实际应用;(3)利用噬菌体展示技术筛选制备了AMOZ单链抗体,经鉴定与亲本单克隆抗体具有相似性能,利用同源模建、分子动力学和分子对接等技术建立了AMOZ单链抗体与半抗原的识别模型,明确了Ser32、Tyr33、Arg99、Asp100、Tyr102、Tyr220、Asp221等七个氨基酸残基为关键识别氨基酸残基,后续定向进化仍在研究中。本项目结果为建立其他超低分子量有害物的免疫检测方法提供理论与技术支撑。在项目资助下,发表了SCI论文6篇,EI论文1篇;获得授权发明专利2项;项目组2名成员晋升高级职称,已培养博士毕业生1名,硕士毕业生3名,本科毕业生8名;在读博士研究生1名。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Application of Time-resolved Fluroimmunoassay for Determination of Furaltadone Metabolite 3-Amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone
应用时间分辨荧光免疫分析法测定呋喃他酮代谢物3-氨基-5-吗啉甲基-2-恶唑烷酮
DOI:10.1016/s1872-2040(16)60951-9
发表时间:2016-08-01
期刊:CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
影响因子:1.2
作者:Deng Li-Hua;Dai Jin-Bo;Shen Yu-Dong
通讯作者:Shen Yu-Dong
Determination of Furaltadone Metabolite in Fish by Chemiluminescence Enzyme Immunoassay
化学发光酶联免疫分析法测定鱼类中呋喃他酮代谢物
DOI:10.1016/s1872-2040(15)60830-1
发表时间:2015
期刊:Chinese Journal of Analytical Chemistry
影响因子:1.2
作者:Dai Jin-Bo;Xu Zhen-Lin;Liu Feng-Yin;Yang Jin-Yi;Sun Yuan-Ming;Wang Hong;Lei Hong-Tao;Shen Yu-Dong
通讯作者:Shen Yu-Dong
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.8.006
发表时间:2015
期刊:现代食品科技
影响因子:--
作者:刘凤银;沈玉栋;肖治理;杨金易;孙远明;王弘;雷红涛;徐振林
通讯作者:徐振林
DOI:10.2174/1386207311316060010
发表时间:2013-06
期刊:Combinatorial chemistry & high throughput screening
影响因子:1.8
作者:Zhenlin Xu;Shiwei Zhang;Yuan-ming Sun;Yu-Dong Shen;Hongtao Lei;Yue-Ming Jiang;S. Eremin;Jinyi Yang;Hong Wang
通讯作者:Zhenlin Xu;Shiwei Zhang;Yuan-ming Sun;Yu-Dong Shen;Hongtao Lei;Yue-Ming Jiang;S. Eremin;Jinyi Yang;Hong Wang
Novel hapten synthesis for antibody production and development of an enzyme-linked immunosorbent assay for determination of furaltadone metabolite 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone (AMOZ)
用于抗体生产的新型半抗原合成以及用于测定呋喃他酮代谢物 3-氨基-5-吗啉代甲基-2-恶唑烷酮 (AMOZ) 的酶联免疫吸附测定法的开发
DOI:10.1016/j.talanta.2012.10.059
发表时间:2013-01-15
期刊:TALANTA
影响因子:6.1
作者:Xu, Zhen-Lin;Shen, Yu-Dong;Jiang, Yue-Ming
通讯作者:Jiang, Yue-Ming
氧氟沙星手性单链抗体制备及其手性识别差异机制研究
- 批准号:20877029
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:30.0万元
- 批准年份:2008
- 负责人:孙远明
- 依托单位:
小分子有害物的特异性识别分子Anticalin制备及特性研究
- 批准号:20477012
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:23.0万元
- 批准年份:2004
- 负责人:孙远明
- 依托单位:
魔芋葡甘聚糖超细粉碎机械力化学效应研究
- 批准号:30070533
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:20.0万元
- 批准年份:2000
- 负责人:孙远明
- 依托单位:
国内基金
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