烟曲霉T-DNA插入突变体库的构建及致病相关突变体的研究

近年来，烟曲霉的感染率和死亡率不断增高，由于对其致病机制了解甚少以及缺乏适合的治疗手段，使其成为医学界关注的焦点。为探讨未知基因在致病机制中的作用，本研究建立并优化了农杆菌介导的烟曲霉强毒株JLC50134的遗传转化体系，构建了T-DNA插入突变体库。对致病相关因素如氧化应激、渗透压、缺氧、弹性蛋白等进行筛选，构建致病相关突变体亚库。利用建立的线虫和小鼠感染模型对突变体进行致病力研究。应用Southern杂交技术，确定T-DNA插入拷贝数，通过hiTAIL-PCR方法获得T-DNA插入侧翼序列，同时结合全基因组序列信息，进行基因定位和功能分析，获得致病相关功能基因，探讨烟曲霉致病机制。整理、储存烟曲霉突变体信息（表型特征、插入拷贝数、插入位点、T-DNA侧翼序列、相关基因功能等），建立烟曲霉T-DNA插入突变体数据库，实施信息化管理，供研究者查询、利用，为烟曲霉研究提供大量的突变体菌株资源，为挖掘未知的功能基因，提供科学依据和技术支撑。目前，尚无人类病原丝状真菌的突变体库，本研究还可为其他病原真菌的研究，提供有价值的参考和借鉴。