Vitamin E脂质体纳米颗粒携带siRNA靶向抑制HCV的实验研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81171628
项目类别：
面上项目
资助金额：
58.0万
负责人：
陈维贤
依托单位：
重庆医科大学
学科分类：
H2109.医学病毒学与病毒感染研究新技术与新方法
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
李生伟；张祯祯；袁拥华；娄茜；胡琴；王曦；詹茜；
关键词：
RNA干扰纳米颗粒丙型肝炎 Vitamin E 靶向治疗

项目摘要

丙型肝炎是严重威胁人类健康的重要传染性疾病，至今仍缺乏广泛有效的控制手段和彻底的解决方案。RNA干扰技术可能成为HCV基因治疗的有效手段，但siRNA转运载体和靶向性问题急需解决。vitamin E是人体所需营养成分之一，通过结合肝细胞表面特异性受体而转运至肝脏代谢，从而具有肝脏靶向性特点。本项目拟在前期工作基础上，合成vitamin E、胆固醇、DOTAP结合的阳离子脂质体纳米颗粒，携带针对HCV 5＇非翻译区的siRNA，分别在细胞模型和动物模型上验证其靶向抑制HCV表达与复制的效果。本课题的实施，将为RNA干扰技术在HCV基因治疗的临床应用方面提供新的思路，具有较大的理论和应用价值。

结项摘要

丙型肝炎是威胁人类健康的重要传染性疾病之一，丙型肝炎病毒感染除引起急、慢性肝炎之外，还易进展为肝纤维化甚至肝癌。临床常采用干扰素α联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎，但存在病毒变异及药物毒副作用的问题。因此，新的治疗手段和药物的开发具有重要的现实意义和应用价值。RNA干扰在慢性病毒感染的治疗方面有着极大的应用前景，但目前仍然存在许多问题和障碍需要探索，包括siRNA在血液中的稳定性和半衰期、细胞对siRNA的摄入效率、siRNA的脱靶效应以及siRNA的靶向转运等。其中最重要的一点就是如何将siRNA有效地传输到特定组织并使之进入特定细胞发挥基因调节作用，合适的转运载体对于siRNA的临床使用至关重要。Vitamin E可能通过结合肝细胞表面受体进入肝细胞，其本身对机体有益无害。本项目拟利用vitamin E、胆固醇、DOTAP构建脂质体纳米颗粒，携带针对HCV基因组的siRNA，特异性抑制细胞中HCV的复制与表达。纳米颗粒中胆固醇和DOTAP组成改良型脂质体可以提高siRNA在血液中的稳定性和转运效率，而vitamin E则实现纳米颗粒的肝细胞靶向性。本研究成功合成了vitamin E-胆固醇-DOTAP脂质体纳米颗粒，并应用该纳米颗粒转运siRNA，在细胞模型和小鼠动物模型上实现了靶向抑制HCV基因的作用。实验分别获得以下结果：（1）合成靶向HCV基因组的siRNAs并在细胞模型中验证了其抑制效果。（2）成功制备了vitamin E-胆固醇-DOTAP脂质体纳米颗粒，具有良好的粒径大小和血清稳定性。（3）纳米颗粒能结合siRNA并转运至肝细胞，抑制了靶基因的表达。（4）在小鼠模型上，纳米颗粒-siRNA成功抑制了HCV core靶基因的表达。（5）活体成像实验显示纳米颗粒-siRNA可成功抑制HCV 5 ‘UTR驱动的虫荧光素酶基因表达活性。（6）纳米颗粒对细胞和小鼠无明显的毒副作用。. 在本项目的资助下，已发表论文10篇。其中SCI论著8篇，其它论文2篇。尚有2篇SCI论文在审稿之中。通过本项目的实施，培养硕士研究生6名，3名已经毕业，3名在读。本课题的实施，锻炼了课题组年轻的研究队伍，使研究人员具备更好的实验技能和科研思维，掌握研究领域的前沿动态，进一步明确研究方向，为将来的发展奠定了基础。