乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的甲基化及其对HBV复制与表面抗原水平的调控

批准号:
81071354
项目类别:
面上项目
资助金额:
32.0 万元
负责人:
张继明
依托单位:
学科分类:
H2103.肝炎病毒与感染
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
毛日成、秦艳丽、朱浩翔、杨飞飞、谢怡
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中文摘要
慢性乙肝患者血清HBV DNA和HBsAg水平是抗病毒疗效的监测指标,但个体间基线水平差异较大,其影响因素尚未明确。我们前期研究发现,HBV基因组含3个CpG岛;慢性乙肝患者肝组织内HBV cccDNA CpG岛甲基化程度不一。我们推测,CpG岛甲基化对HBV cccDNA功能可能有调控作用。本课题拟用滚环扩增方法特异性扩增肝组织内HBV cccDNA,用特异性PCR、克隆、测序等方法检测CpG岛甲基化,分析甲基化与病毒载量及HBsAg水平之间的关系;通过细胞转染实验,检测细胞内甲基化酶的表达水平,以了解HBV感染是否促进HBV自身甲基化;观察不同CpG岛分别甲基化对HBV复制和HBsAg表达的影响。该研究将初步阐明HBV cccDNA甲基化对HBV 复制和HBsAg水平的影响,加深对表观遗传学甲基化修饰对HBV cccDNA功能调控作用的认识,为寻找控制HBV复制的新方法提供理论基础。
英文摘要
慢性乙肝患者血清HBV DNA和HBsAg水平是抗病毒治疗重要的监测指标。HBV cccDNA以微染色体形式存在于肝细胞核内,作为病毒mRNA的转录模版,其转录活性直接影响HBV载量以及表面抗原水平。而随着对HBV复制过程研究的深入,人们逐渐认识到表观遗传学修饰是参与HBV cccDNA功能调控的重要机制。申请人圆满地完成了任务书内的所有内容,取得的主要的成果如下:1)本课题组从NCBI数据库中取得A-J基因型的HBV全长序列,用MethPrimer软件分析发现HBV基因组有3个CpG岛,分别与HBV主要调控元件序列重叠。其中岛1临近HBV S基因起始位点,岛2与增强子I、II以及核心启动子重叠,岛3则包含了HBV P基因的起始位点,并且与启动子sp1相重叠。我们还在国际上首次发现了HBV中的CpG岛,作为甲基化的目标作用位点,在不同基因型的HBV基因组中分布存在差异,并且在B、C、D、H基因型的部分HBV DNA序列中,除了目前公认的三个CpG岛外,在不同的位置上还存在着新的CpG岛。2)本课题组通过亚硫酸氢盐PCR测序以及克隆分析技术分析患者肝组织中HBV cccDNA的CpG岛甲基化分布情况,同时结合患者的临床数据进行相关性分析,发现乙肝患者血清的HBV DNA并无甲基化修饰,而肝组织中HBV cccDNA存在一定程度的甲基化。3)HBV cccDNA CpG岛2的甲基化程度与血清中HBV DNA载量呈负相关,推测岛2的甲基化对cccDNA的转录活性具有直接的抑制作用,进而降低了HBV的复制水平。同时我们通过体外定向甲基化构建了含单个CpG岛甲基化的HBV DNA单体,进行体外细胞转染,检测发现HBV CpG岛2的甲基化修饰能够调控HBV转录,进而影响HBV复制,验证了岛2甲基化对HBV cccDNA的功能调控作用。4)我们在国际上首次发现了HBV cccDNA岛3的甲基化程度与血清中HBsAg水平呈负相关,提示岛3的甲基化影响了HBsAg的表达水平,推测可能与sp1启动子活性受到抑制有关。本课题的研究结果证实了DNA甲基化抑制了HBV cccDNA的转录活性,进而降低了病毒复制以及表面抗原水平,明确了DNA甲基化在乙肝病毒复制中重要的调控作用,为探索HBV感染治疗方法提供了新的理论依据。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2013
期刊:World Journal of Gastroenterology
影响因子:--
作者:Jin, Jia-Lin;Hu, Piao;Lu, Jia-Hong;Luo, Su-Shan;Huang, Xiao-Yun;Weng, Xin-Hua;Zhang, Ji-Ming;
通讯作者:
Inhibition of hepatitis B virus replication by the host zinc finger antiviral protein.
宿主锌指抗病毒蛋白抑制乙型肝炎病毒复制
DOI:10.1371/journal.ppat.1003494
发表时间:2013
期刊:PLoS pathogens
影响因子:6.7
作者:Mao R;Nie H;Cai D;Zhang J;Liu H;Yan R;Cuconati A;Block TM;Guo JT;Guo H
通讯作者:Guo H
Impact of nucleos(t)ide analogues on the estimated glomerular filtration rate in patients with chronic hepatitis B
核苷(酸)类似物对慢性乙型肝炎患者估计肾小球滤过率的影响
DOI:--
发表时间:--
期刊:Journal of Viral Hepatitis
影响因子:2.5
作者:张继明
通讯作者:张继明
Detection of lamivudine- or adefovir-resistant hepatitis B virus mutations by a liquid array
通过液体阵列检测拉米夫定或阿德福韦耐药的乙型肝炎病毒突变
DOI:10.1016/j.jviromet.2011.04.005
发表时间:2011-07-01
期刊:JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS
影响因子:3.1
作者:Liu, Hongyan;Mao, Richeng;Zhang, Jiming
通讯作者:Zhang, Jiming
Comparative analysis of CpG islands among HBV genotypes.
HBV基因型间CpG岛的比较分析
DOI:10.1371/journal.pone.0056711
发表时间:2013
期刊:PloS one
影响因子:3.7
作者:Zhang Y;Li C;Zhang Y;Zhu H;Kang Y;Liu H;Wang J;Qin Y;Mao R;Xie Y;Huang Y;Zhang J
通讯作者:Zhang J
HBeAg促进HBsAg特异性B细胞耗竭的作用及机制研究
- 批准号:82372237
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:49万元
- 批准年份:2023
- 负责人:张继明
- 依托单位:
肝组织内宿主基因ZMYM3通过抑制乙肝病毒X蛋白表达调控cccDNA转录活性的机制研究
- 批准号:--
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55万元
- 批准年份:2021
- 负责人:张继明
- 依托单位:
基于膜蛋白FAM176A的基因治疗方法在慢性乙肝病毒感染动物模型中的抗病毒作用、安全性及其机制研究
- 批准号:81871640
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:57.0万元
- 批准年份:2018
- 负责人:张继明
- 依托单位:
剪切刺激因子-2通过PTB-HBV PRE协同跨核转运途径抑制HBV复制的机制研究
- 批准号:81672009
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:57.0万元
- 批准年份:2016
- 负责人:张继明
- 依托单位:
宿主肝细胞内SEL1L基因对乙型肝炎病毒复制的调控机制以及miRNA-125b对SEL1L基因表达的表观遗传学修饰
- 批准号:81471933
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:63.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:张继明
- 依托单位:
宿主细胞跨膜蛋白基因FAM176A对乙型肝炎病毒复制调控的机制研究
- 批准号:81271833
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:60.0万元
- 批准年份:2012
- 负责人:张继明
- 依托单位:
HBV耐药优势株形成的分子机制
- 批准号:30872242
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:8.0万元
- 批准年份:2008
- 负责人:张继明
- 依托单位:
国内基金
海外基金
