肌内脂肪含量是评价家畜肉品质的重要指标。本项目以牛为实验动物，从2010年起至2013年12月按项目研究计划圆满完成了项目涉及的研究内容，主要研究成果如下：采集了牛（西门塔尔牛）皮下脂肪及第6-7根肋骨间的肌内脂肪组织，分别提取两种脂肪组织中的总RNA用于芯片实验；miRNA表达谱芯片杂交实验（经过生物素标记MiRNA、芯片杂交、芯片清洗染色、扫描等步骤后，采用Lowess*方法对芯片数据进行归一化，并基于归一化后数据进行t-Test和Cluster分析）筛选牛皮下脂肪和肌内脂肪差异表达的miRNA，同时考虑以下因素：①p-value < 0.01；②样品两两比较的差异倍数建议 >= 4（即|log2| >= 2），至少 >2（即|log2|>1）；③两样品中，较强的杂交信号值 >= 2000。结果：在213个表达的miRNAs中发现了88个差异表达的miRNAs，其中有30个miRNAs在皮下脂肪和肌内脂肪中达到差异极显著水平（P<0.01）；根据以上三个条件，对11个候选miRNAs进行 RT-qPCR验证。结果在11个候选差异表达的miRNA中，10个与芯片结果相一致，说明芯片结果可信度相对较高，而miRNA-143、miRNA-145、miRNA-140及miRNA-27b等在肌内脂肪中高表达；采用TargetScan软件对候选的miRNA进行靶基因预测，发现每个miRNA至少对应2个及以上靶基因，而这些靶基因基本都是与脂肪代谢、分化的基因；对目标miRNAs进行了GO和KEGG的富集性分析，显示目标miRNA的预测靶基因在MAPK、Wnt、Hedgehog、TGF-beta、GnRH等信号通路中显著富集，其中在MAPK信号通路中富集度最高。. 采用“天花板”培养方法体外培养了牛肌内前体脂肪细胞，合成了候选miRNA-143的抑制剂，将其稳定转染至牛肌内前体脂肪细胞中，发现肌内前体脂肪细胞分化过程中miRNA-143表达量逐渐升高；抑制miRNA-143的表达，可以抑制肌内前体脂肪细胞分化及细胞内脂肪的积聚，脂肪分化关键基因C/EBPa及FABP-4的表达量减少，说明miRNA-143至少是通过C/EBPa及FABP-4来调节肌内脂肪的形成。