金英黄归汤对小鼠乳腺上皮细胞中TLR2和TLR4信号转导的影响

本项目以小鼠乳腺上皮细胞和金英黄归汤及其活性成分为研究对象，开展了金英黄归汤对小鼠乳腺上皮细胞中TLR2和TLR4信号传导影响的研究，详细考察了小鼠乳腺上皮细胞培养、天然免疫功能、细胞上是否存在TLR2和TLR4受体及其介导细胞因子分泌、金英黄归汤安全浓度、金英黄归汤对乳腺上皮细胞的天然免疫具有调节作用，TLR4介导信号转导的影响及机制。具体内容如下：. 优化了小鼠乳腺上皮细胞体外培养方法，并研究了其分泌细胞因子功能。发现混合酶消化法能更好地进行小鼠乳腺上皮细胞的体外培养，其在脂多糖（LPS）刺激下分泌细胞因子TNF-α和IL-8而具有一定的天然免疫能力。. 检测了乳腺上皮细胞中TLR2或TLR4受体蛋白，并研究了TLR2或TLR4在LPS刺激小鼠乳腺上皮细胞中信号转导的作用。发现小鼠乳腺上皮细胞膜上确实存在TLR2和TLR4两种受体蛋白，在LPS刺激下主要是通过TLR4对LPS信号进行转导，而TLR2不对LPS信号进行转导。. 测定了金英黄归汤及其三个主要活性成分在细胞上的安全浓度，并研究药物在小鼠乳腺上皮细胞的IC50值，结果显示金英黄归汤及其三个主要活性成分绿原酸、连翘苷和黄芪多糖浓度分别为0.49mg/mL、0.49 mg/mL、0.06 mg/mL和1.95mg/mL时不影响小鼠乳腺上皮细胞的生长。其中金英黄归汤、绿原酸和连翘苷IC50分别为：12.25mg/mL、30.80 mg/mL和13.71 mg/mL，为下一步实验研究提供了坚实的数据。. 研究了药物对细胞因子TNF-α、IL-8和IL-6分泌的影响，并研究了药物对乳腺上皮细胞TLR4和MyD88 mRNA表达和TLR4蛋白表达的影响。结果提示，金英黄归汤具有抑制细胞分泌TNF-α、IL-8和IL-6，其作用机制是降低了细胞TLR4、MyD88的mRNA表达量，以及TLR4蛋白的表达量，阻断细胞内信号转导通路。绿原酸、黄芪多糖也可抑制IL-8和TNF-α的分泌，其药理作用是可以降低细胞TLR4、MyD88的mRNA表达量，却升高TLR4的表达量。连翘苷可以降低LPS所致的TLR4表达量增加，同时能降低LPS所致的TLR4、MyD88 mRNA表达量增加，阻断细胞内信号转导通路，阐明药物的药理作用具有一定的理论意义，也为进一步展开深入研究拓展了思路。