淡水鱼主要致敏原经小鼠肠道树突状细胞CD80/86介导CD4+T细胞活化的机制研究
批准号:
81502810
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
18.0 万元
负责人:
周催
依托单位:
学科分类:
H3004.食品卫生
结题年份:
2018
批准年份:
2015
项目状态:
已结题
项目参与者:
李鹏高、王翼飞、刘晓楠、董晓敏、董珊、章冉
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中文摘要
淡水鱼过敏对大众健康的影响已成为当前备受关注的公共卫生问题之一。本课题组前期研究表明致敏模型小鼠肠道中高表达CD80/86的成熟树突状细胞(DCs)数量增多,而DCs及CD80/86分子在鱼类致敏中的作用机制尚不清楚。本研究通过收集淡水鱼过敏人体血清,利用免疫印迹鉴定、分离得到常食用淡水鱼中的主要致敏蛋白,并用其致敏处理C3H/HeJ小鼠后,测定其血清特异性抗体、细胞因子及血浆组胺水平,建立并验证淡水鱼致敏蛋白小鼠致敏模型;通过磁珠分选、小分子干扰RNA和流式细胞术从致敏小鼠获得低表达CD80或CD86的DCs,将其分别与鱼致敏蛋白和CD4+ T细胞共培养,检测T细胞亚群及细胞因子IL-4、IL-5和IL-10的水平,研究肠道DCs亚群通过CD80和CD86活化CD4+ T细胞的机制。本研究对阐明鱼致敏蛋白肠道致敏分子机制有重要意义,可为预防食物过敏提供科学依据。
英文摘要
Food allergy caused by freshwater fish has been one of the current public health problems because its serious influence to human health. Our preliminary study suggested that number of intestinal dendritic cells (DCs) which high expressing CD80/86 was significantly increased in sensitized mice, while the detailed role and mechanism of DCs and CD80/86 in CD4 + T cell activation has not yet been elucidated. In present study, protein extracts of widely consumed freshwater fish and fish allergic human serum were collected to identify the main allergic proteins in freshwater fish using western blot. Then an ideal mice allergy model to freshwater fish allergen will be established through measuring levels of specific antibodies and cytokines in serum, histamine in plasma and investigate allergic manifestation such as body temperature and blood pressure changes after oral administration.to C3H/HeJ mice. The DCs that low expressing CD80 or CD86 will be obtained by magnetic cell sorting, small interfering RNA and flow cytometry. Then the two kinds of DCs will be co-cultured with freshwater fish allergen and CD4+ T cells respectively. The levels of T cells subsets and cytokines (IL-4, IL-5 and IL-10) will be detected to research the mechanism of CD4+ T cells activation by different DCs subsets through CD80 or CD86 after 96h of co-culture. The results of this research would help us to further clarify the molecular mechanism of intestinal sensitization by fish allergen. Results from the present study would be helpful in prevention of food allergy.
世界卫生组织(World Health Organization, WHO)研究表明,全球有22%-25%的人患有过敏性疾病,其发病率还在迅速增加,而其中由食物过敏引发的过敏性疾病占90%左右。目前已被国际免疫学联合会(International Union of Immunological Societies, IUIS)认定的最重要的8类食物过敏原为大豆、花生、小麦、坚果、牛奶、鱼、蛋类及甲壳纲动物。其中,鱼类营养丰富,味道鲜美,是居民生活中不可或缺的食物,但由鱼类引发的食物过敏性也不容小觑。我国是一个水产品生产和消费大国,鱼类在我国居民饮食结构中占有重要地位,鱼类过敏问题也是我国食品安全管理的重要部分。目前关于水产品过敏研究较多的为贝壳类水产品过敏,而对鱼类,尤其是淡水鱼类过敏的相关研究较缺乏。因此,本研究主要研究了国人最常食用的淡水鱼类中的致敏蛋白,并将其中的代表性致敏蛋白纯化后,对Balb/C小鼠进行致敏处理,研究其致敏机理。.本研究采用凯基全蛋白提取试剂盒(KGP250)提取四种淡水鱼肌肉组织蛋白,并通过BCA方法测定提取获得的蛋白溶液的浓度。采用SDS-PAGE凝胶电泳分析获得的全蛋白提取物中的蛋白分子量,再通过间接酶联免疫法(ELISA)检测食物过敏患者血清抗体水平,判断其是否对淡水鱼类过敏,然后经过 Western Blot技术鉴定不同种类淡水鱼中的致敏蛋白。.经SDS-PAGE凝胶电泳后,淡水鱼主要蛋白大小基本为70、49、38、36、15-10kDa;对患者血清进行ELISA检测发现不同的食物过敏患者可能对不同的淡水鱼类发生过反应。经过免疫印迹实验进一步鉴定,四种淡水鱼蛋白提取物与过敏血清特异性IgG4和IgE均发生结合反应,且丰度较高的蛋白分子量为40-36kDa。另外,鲈鱼中含有一种明显产生致敏性的15-10KDa的蛋白,推测为小清蛋白。因此,初步判定分子量为40-36kDa的蛋白为广泛存在于淡水鱼类中的致敏蛋白,而15-10KDa小清蛋白为少数淡水鱼中含有的蛋白,这能够为国人避免鱼类过敏提供参考。.
期刊论文列表
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会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2018
期刊:细胞与分子免疫学杂志
影响因子:--
作者:徐逸;周催
通讯作者:周催
DOI:--
发表时间:2018
期刊:中国公共卫生
影响因子:--
作者:吕帆;周催
通讯作者:周催
基于树突状细胞介导Tregs细胞分化和增殖探讨肠道梭菌抑制食物过敏的作用及其机制
- 批准号:82273633
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:52万元
- 批准年份:2022
- 负责人:周催
- 依托单位:
国内基金
海外基金















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