牛泡沫病毒Bet蛋白的功能及作用机制研究

泡沫病毒具有独特的基因组结构、表达调控机制和特殊的进化地位，可能是正反转录病毒和嗜肝DNA病毒等副反转录病毒之间进化的桥梁，也是构建反转录病毒基因转移载体良好的出发毒株。本研究围绕BBet蛋白对BFV复制的负调控作用展开，主要包括以下几个方面：1、获得可灵敏、定量检测BFV复制及感染性改变的指示细胞系；2、构建了野生型和缺失BBet的BFV感染性克隆及稳定表达BBet的细胞系，在病毒水平确证了BBet对BFV复制的负调控作用；3、在分子水平确证了BBet对BTas激活BFV LTR/IP的抑制作用。 4、对BBet负调控BTas的反式激活作用的分子机制进行了研究：证明BBet蛋白可二聚化，BBet不影响BTas在细胞中的定位，BBet蛋白自身不能结合BFV-LTR/IP，确证BBet与BTas之间的相互作用并初步界定其相互作用区域；BBet通过干扰BTas蛋白的二聚化，从而抑制其转录激活作用，进而影响BFV的复制活性。上述实验结果，证实了BBet在BFV复制周期中的负调控作用，初步揭示其负调控的分子机制，表明BBet可能是BFV潜伏感染的重要原因之一。