红曲菌γ-氨基丁酸代谢相关基因(gabaX)的克隆、鉴定和功能分析

批准号:
31070008
项目类别:
面上项目
资助金额:
33.0 万元
负责人:
蒋冬花
依托单位:
学科分类:
C0101.微生物多样性、分类与系统发育
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
张应烙、张萍华、路梅、蔡琪敏、叶砚、嵇豪、周琴、杨叶、蓝丽精
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中文摘要
对我国红曲菌资源多样性进行调查,用HPLC分析测定各地收集的386株红曲菌γ-氨基丁酸(GABA)含量,经筛选获一GABA产量达10 g/L以上的Mr-5菌株。以该菌株为受体进行农杆菌介导的转化获一定量的T-DNA标签库。筛选与GABA产量相关的突变体,采用TAIL-PCR等方法克隆GABA产量相关的基因(命名为gabaX),测序后通过信息生物学比较分析相关真菌(啤酒酵母菌、构巢曲霉、烟曲霉、米曲霉等)gabaX序列的同源性,预测其保守序列、可能的功能及相关信息。构建基因缺失突变体、基因恢复突变体和插入突变体验证gabaX基因的功能;构建gabaX-GFP融合表达载体,用激光共聚焦对gabaX基因进行定位和时空表达分析。本项目研究目标是克隆3~5个新的红曲菌GABA代谢相关的基因,并对其功能和时空表达动态进行分析,以期实现从基因水平上对GABA产量进行调控。
英文摘要
红曲菌(Monascus)是一种重要的微生物资源,在生长过程中能产生γ-氨基丁酸(GABA)、红曲色素等多种生理活性物质。. 本项目以实验室筛选的红色红曲菌(Monascus ruber)Mr-5专利菌株为实验材料,建立了根癌农杆菌介导红色红曲菌的高效转化体系;通过PCR鉴定和遗传稳定性分析等,成功构建了含有5300多个红色红曲菌转化子的T-DNA插入突变体库;分析了代表性转化子的菌落形态、显微形态、主要代谢产物分析如GABA、红曲色价、Monacolin K、桔霉素含量等的变化,筛选获得了40株GABA含量变化较大的转化子。. 采用TAIL-PCR技术克隆获得了假定蛋白基因、细胞色素C 过氧化物酶基因等。假定蛋白基因大小为526 bp,与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)FGSC A4的假定蛋白AN7090.2有98%相似性。采用RACE和降落PCR(Touchdown PCR)等技术克隆获得了谷氨酸脱羧酶(GAD)基因和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)基因,在红曲菌中首次克隆到GAD和GABA-T基因。. GAD基因cDNA序列全长为1784 bp,包含一个1536 bp的编码GAD基因的开发阅读框(ORF),152 bp的5’-UTR序列和96 bp的3’-UTR序列;起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,编码511个氨基酸;理论分子量和等电点(PI)分别为57789.7 Da和6.05,催化位点为赖氨酸(Lys,K),结合位点由8个氨基酸构成;与黑曲霉(A. niger)的相似性约为80%。. GABA-T基因cDNA序列全长为1563 bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,编码520个氨基酸;理论分子量和等电点(PI)分别为57534.9 Da和9.12,催化位点为赖氨酸(Lys,K),结合位点由8个氨基酸构成。与黑曲霉(A. niger)的相似性约为82%。. 利用qRT-PCR技术检测了不同培养时间Mr-5菌株的GAD和GABA-T基因的相对表达情况;对GAD基因进行了大肠杆菌原核表达和催化活性分析。. 项目实施期申请国家发明专利3件,其中2件已授权;发表研究论文15篇,其中SCI收录论文3篇;培养硕士生4名。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2013
期刊:微生物学杂志
影响因子:--
作者:齐育平;曹丽凌;黄娜;孙青
通讯作者:孙青
DOI:--
发表时间:2013
期刊:浙江师范大学学报(自然科学版)
影响因子:--
作者:曹丽凌;齐育平;梁帅帅;施晓莉;蒋冬花
通讯作者:蒋冬花
DOI:--
发表时间:2011
期刊:中国粮油学报
影响因子:--
作者:嵇豪;蒋冬花;周琴;汪鹏荣;董夏梦;蔡琪敏;
通讯作者:
Alkali extraction and in vitro antioxidant activity of Monascus mycelium polysaccharides
红曲菌丝体多糖的碱提取及其体外抗氧化活性
DOI:10.1007/s13197-012-0618-y
发表时间:2014-07
期刊:J Food Sci Technol
影响因子:--
作者:Pengrong Wang;Danfeng Chen;Donghua Jiang;Xiameng Dong;Panpan Chen;Yaoxue Lin
通讯作者:Yaoxue Lin
DOI:--
发表时间:2011
期刊:中国粮油学报
影响因子:--
作者:汪鹏荣;蔡琪敏;崔宇辉;蒋冬花;陈丹凤
通讯作者:陈丹凤
红曲霉分生孢子形成相关基因的克隆、功能分析和表达调控
- 批准号:31570013
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:65.0万元
- 批准年份:2015
- 负责人:蒋冬花
- 依托单位:
紫色红曲菌色素和桔霉素合成关键基因的克隆及表达调控
- 批准号:31270061
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:80.0万元
- 批准年份:2012
- 负责人:蒋冬花
- 依托单位:
国内基金
海外基金
