胆盐水解酶是肠道微生物（尤其是乳酸杆菌）合成的分解胆汁的一类酶。它在降低哺乳动物血液中的胆固醇方面有重要的作用。大多数人体或动物来源的乳酸杆菌都含有一个或一个以上的编码胆盐水解酶的基因。不同菌株来源的胆盐水解酶在生化特性上略有不同。但是目前还没有研究阐明胆盐水解酶与胆汁中不同底物的作用方式和其催化模式，因此在考察益生菌益生特性时，缺乏选择具有特定催化特性胆盐水解酶的依据。.本项目以来源于乳液乳酸杆菌的具有不同底物特异性的两个胆盐水解酶为研究对象，通过考察酶催化反应动力学特性、底物作用特性和酶分子结构对酶催化特性和酶稳定性等的影响，阐明了两类胆盐水解酶的以下生化特性：.（1）BSH1的最适反应pH范围宽于BSH2，并且它的热稳定性及氧化稳定性明显高于BSH2。BSH2对所有结合胆盐的催化效率和亲和能力均高于BSH1；.（2）通过酶反应动力学分析，首次揭示了胆盐水解酶催化反应中的变构特征和酶催化反应的正协同性；.（3）采用等温滴定量热方法分析酶反应的热力学规律，结合酶与产物结合后的二级结构及活性的变化，提出BSH首先识别结合胆盐中的固醇核基团，然后发生酶分子结构和底物特异性变化的酶催化反应机制；.（4）以来源于荚膜梭菌胆盐水解酶的晶体结构为模型，通过同源建模和定点突变发现：BSH1和BSH2酶分子结构中存在不同的底物结合位点；位于疏水腔入口处的底物结合位点不仅与底物特异性有关，而且与BSH的稳定性也密切相关；.（5）采用理性设计结合氨基酸定点突变的方法，证明了唾液乳杆菌胆盐水解酶BSH1中Cys2和Thr264分别是BSH1催化TCA和GCA的关键残基，并对酶的催化活性的保持起关键作用。.项目提出并阐明了两类胆盐水解酶的催化反应机制，对于研究酶的结构与功能具有重要的参考意义。研究结果为揭示和分析BSH在对菌株贡献抵抗胆汁胁迫能力上的差异，探索胆盐水解酶与宿主物质代谢之间的相互影响，为建立胆盐水解酶酶分子结构和催化特性与其生理功能之间的关系提供了有力的理论支持。