表观遗传修饰对不同线粒体DNA单倍型来源胚胎发育的机理研究

本课题针对克隆重编程中核-质互作的关键问题，以活体取卵（OPU）获得的遗传背景清晰、经PCR－RFLP对线粒体DNA进行分型的牛卵母细胞进行核移植，开展以下研究：比较不同线粒体单倍型卵母细胞与供核细胞不同组合的克隆效率；对胚胎发育中重要调控因子如Oct4、Nanog和Sox2等在不同来源的体内胚、IVF胚及同型和异型胚中的表达进行分析；对同型和异型克隆胚的全基因组H3K9的甲基化程度进行比较，以分析表观遗传修饰对不同来源胚胎发育中的可能影响；对甲基化修饰过程中的关键酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在不同来源胚胎中的表达进行检测，以找到DNA甲基化影响胚胎发育的直接证据；在此基础上，对发育过程中的关键因子如Oct4、Nanog和Sox2等在不同来源胚胎中的DNA甲基化程度和关键位点进行比较分析，系统地探讨表观遗传修饰对克隆胚胎发育的作用机理。