基于SAMe基因比较的金银花类药材质量评价方法的建立

本项目利用RNA-seq技术对忍冬、红白忍冬花蕾、盛花、败花期基因表达谱进行分析，并结合化学成分分析，构建了金银花活性成分基因调控网络。在此基础上开展以下两个方面工作：（1）忍冬、红白忍冬SAMe基因比较研究：从转录组数据中共获得133个忍冬、122个红白忍冬SAMe基因；利用基本涵盖生物类别的21中生物SAMe基因，进行进化树分析，将金银花SAMe基因划分为3簇。SAMe基因拷贝数与表达量分析结果暗示I-1, I-12, II-2, II-8和II-11亚家族的忍冬冗余基因可能发挥重要功能，且通过比对其直系同源基因间序列差异，共检测到57个SNPs 和5个InDels，且推测共有13个氨基酸残基发生变异，但这些序列变异基因的功能尚不清楚，需要进一步研究。另一方面，从已知功能基因入手，筛选出1个SABATHMT基因可能参与花期、香气的调控，且该基因内含子序列在忍冬、红白忍冬中存在碱基变异。但由于变异位点较少，因此很难建立数学模型。（2）活性成分相关生物合成关键基因的筛选与评价方法的建立：选择忍冬、红白忍冬、红腺忍冬、水忍冬为研究对象，分析金银花活性成分基因调控网络中的关键基因，FatB、IspE和IspH及绿原酸、木樨草苷生物合成途径关键酶基因在不同组织、不同近缘种中的表达情况，并结合化学成分分析，发现LJPAL与活性成分积累密切相关。分别利用LJPAL1、LJPAL2、LJPAL3蛋白序列制备多克隆抗体，并建立ELISA方法，用于预测金银花种质活性成分含量。共发表论文9篇，其中SCI收录论文3篇。