阿维菌素抗性小菜蛾GABA和GluCl受体基因功能的RNAi研究

GABA受体的荧光定量分析：同一种群中，GABA基因的表达量随龄期的增长而降低；同一龄期中，抗性种群的相对表达量较低，除第一龄期外，其他各龄期的相对表达量差异显著。. 小菜蛾抑制性谷氨酸受体的RNA干扰：采用RNA干扰技术对小菜蛾IGluR的功能进行了初步研究。结果表明：小菜蛾2龄和3龄幼虫中dsRNA的最佳注射量分别为50.6 nL和71.3 nL。2龄和3龄幼虫在注射dsRNA 36 h和24 h后IGluR基因的转录后水平分别下降了32.67%和49.30%。幼虫发生RNA干扰后对阿维菌素的敏感性结果显示，注射了IGluR dsRNA的幼虫死亡率显著低于对照。结果说明，小菜蛾IGluR是阿维菌素的潜在靶标之一。. 小菜蛾Gluclα 基因的相对表达量和序列分析：各个龄期的相对表达量差异不显著，最高为2.38 倍。抗性小菜蛾品系GluClα 基因序列在氨基酸序列的第61-82 之间出现了2 套替换模式，敏感和抗性品系的单头和挑斑替换率差异不大；针对GluClα 基因核苷酸序列自第1307 位插入了64bp 核苷酸序列，导致翻译提前终止，敏感品系的单头和挑斑插入率均高于抗性品系；在第374 位至第385 位的12 个氨基酸发生稳定性的缺失。抗性品系的单头缺失率（61.11%）和挑斑缺失率（32.20%）均高于室内敏感品系的6.25%和20.00%，表明抗性小菜蛾品系GluClα 基因发生稳定性的缺失明显高于敏感品系。. 小菜蛾IGluR 的电生理研究：通过分别注射GluClα 基因正常和缺失的cRNA，在非洲爪蟾卵母细胞中表达同聚体IGluR。电压钳检测结果表明，注射正常GluClα 基因表达的IGluR（PxIGluR-N）对谷氨酸的 EC50 为52.61uM，而注射缺失GluClα 基因表达的IGluR（PxIGluR-D）对谷氨酸的EC50 为689.7uM。可知，PxIGluR-D 对谷氨酸的敏感性比PxIGluR-N 下降了13.11 倍。当用阿维菌素刺激时，PxIGluR-D的EC50（1146nM）是PxIGluR-N（118.4nM）的9.68 倍，可见，当GluClα 基因发生缺失时，IGluR对阿维菌素的敏感性也降低。表明GluClα 发生缺失可能是导致小菜蛾对阿维菌素抗性的原因之一。