小菜蛾对阿维菌素抗性相关P-糖蛋白基因的筛选及功能分析

批准号:
31171876
项目类别:
面上项目
资助金额:
55.0 万元
负责人:
吴青君
依托单位:
学科分类:
C1405.植物化学保护
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
雷妍圆、潘慧鹏、李如美、杨家强、施秀珍、郭兆将
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
微信扫码咨询
中文摘要
小菜蛾对阿维菌素抗性与表皮穿透作用降低、解毒酶系活性提高和靶标位点变异等多因素有关,但目前的研究结果尚不能完全解释其抗性机理,其它重要的抗性相关因素有待进一步探明。P-糖蛋白(Pgp)属于ABC转运蛋白超家族,主要功能是利用ATP水解的能量将与其结合的药物逆浓度泵出细胞,降低细胞内药物浓度而产生抗性,Pgp的过量表达在一些多抗性害虫和伊维菌素抗性线虫中起重要作用。本研究拟克隆阿维菌素敏感和抗性小菜蛾Pgp基因,进行SNP位点筛查,筛选与抗性相关的Pgp 基因;荧光定量分析Pgp基因在不同龄期和不同抗性品系中表达量的差异;将Pgp基因在昆虫细胞(SF+)中表达后层析纯化,同时直接从虫体内分离纯化Pgp;将纯化的Pgp与蛋白磷脂体重组,研究其与阿维菌素等药剂的亲和特性,采用荧光底物研究其转运功能等,旨在明确Pgp在抗性中的作用,阐明小菜蛾对阿维菌素的抗性机理,同时为抗性逆转剂的研发提供依据。
英文摘要
从阿维菌素敏感和抗性小菜蛾体内获得的P-糖蛋白基因命名为PxPgp1,该蛋白的N-端在细胞内,包括12个跨膜区。利实时荧光定量技术,检测发现PxPgp1在小菜蛾的整个生命过程中表达,其中,在幼虫期表达量不断升高,在雄性成虫中表达量比其他龄期均高,在中肠中表达量最高,在头和表皮中的表达量很低。尽管在抗性品系中未发现稳定的突变位点,但该基因在抗性品系中的表达量显著高于敏感品系,并且对低剂量阿维菌素有应激反应。初步构建了ABCB1基因真核表达载体与原核表达体系。测定了阿维菌素敏感和抗性品系小菜蛾的转录组,共获得48G的数据量,共发现新基因11217个;新发现ABC转运蛋白15个,P450基因16个和谷胱甘肽转移酶12个。发现有一P450家族基因显著上调,克隆并获得该基因的全长,国际命名委员会命名为CYP340W1基因。CYP340W1基因在各个龄期都有表达,在头部的表达量最高,抗性品系CYP340W1的表达量显著高于敏感品系;CYP340W1基因能够被阿维菌素诱导表达。对该基因进行RNA干扰后6小时表达量显著下降,持续到18小时,24小时开始恢复。干扰后生物测定结果显示,干扰该基因后死亡率比对照组显著上升,表明CYP340W1可能与小菜蛾阿维菌素抗性相关。.综上所述,小菜蛾对阿维菌素产生中等抗性水平时,抗性由多因子控制。PxPgp1基因和CYP340W1基因的上调表达在抗性中均起一定作用。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.1111/eea.12232
发表时间:2014-11
期刊:Entomologia Experimentalis et Applicata
影响因子:1.9
作者:Feng Liu;Xiuzhen Shi;Yanpo Liang;Qing-jun Wu;Bao-yun Xu;W. Xie;Shaoli Wang;Youjun Zhang;Nannan Liu
通讯作者:Feng Liu;Xiuzhen Shi;Yanpo Liang;Qing-jun Wu;Bao-yun Xu;W. Xie;Shaoli Wang;Youjun Zhang;Nannan Liu
Molecular Cloning and Characterization of a P-Glycoprotein from the Diamondback Moth, Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae)
小菜蛾 P-糖蛋白的分子克隆和表征(鳞翅目:小菜蛾科)
DOI:10.3390/ijms141122891
发表时间:2013-11-01
期刊:INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
影响因子:5.6
作者:Tian, Lixia;Yang, Jiaqiang;Wu, Qingjun
通讯作者:Wu, Qingjun
DOI:--
发表时间:2012
期刊:生物安全学报
影响因子:--
作者:施秀珍, 吴青君, 王少丽, 徐宝云, 谢文, 张友军
通讯作者:施秀珍, 吴青君, 王少丽, 徐宝云, 谢文, 张友军
Identification and Characterization of the Gene CYP340W1 from Plutella xylostella and Its Possible Involvement in Resistance to Abamectinfrom Plutella xylostella and Its Possible Involvement in Resistance to Abamectin
小菜蛾基因CYP340W1的鉴定、表征及其可能参与的阿维菌素抗性
DOI:--
发表时间:--
期刊:International Journal of Molecular Sciences
影响因子:5.6
作者:Shaoli Wang;Youjun Zhang;Fengshan Yang;Qingjun Wu
通讯作者:Qingjun Wu
TGF-β/SMAD途径介导的TSWV对西花蓟马性比调控机制研究
- 批准号:--
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:54万元
- 批准年份:2022
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
多杀菌素抗性西花蓟马nAChRs变异转录本调控机制研究
- 批准号:31972310
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:58.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
多杀菌素抗性西花蓟马生殖适合度代价的调控机理研究
- 批准号:31772199
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:60.0万元
- 批准年份:2017
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
多杀菌素抗性西花蓟马与番茄斑萎病毒(TSWV)互作因子的鉴定及功能分析
- 批准号:31572037
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:68.0万元
- 批准年份:2015
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
nAChRs突变介导的西花蓟马对多杀菌素抗性机理研究
- 批准号:31371965
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:80.0万元
- 批准年份:2013
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
阿维菌素抗性小菜蛾GABA和GluCl受体基因功能的RNAi研究
- 批准号:31071709
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:34.0万元
- 批准年份:2010
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
阿维菌素抗性小菜蛾GluCl受体基因的克隆和功能分析
- 批准号:30771431
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:26.0万元
- 批准年份:2007
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
阿维菌素抗性小菜蛾GABAa受体分子克隆及药理性质研究
- 批准号:30370947
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:18.0万元
- 批准年份:2003
- 负责人:吴青君
- 依托单位:
国内基金
海外基金
