泛素连接酶E3新一类亚家族成员ZNF313靶蛋白和相关蛋白的鉴定及在T细胞活化免疫调控中的功能研究

本研究中，我们首次报道了RNF166和ZNF313（RNF114）均在T细胞内内源性表达。进一步通过构建完整的ZNF313 和ZNF313结构域缺失突变重组表达质粒，明确了ZNF313及其结构域对T细胞活化具有正向调控作用。RNF114过表达促使T细胞激活效率比提高43%。我们采用类似的研究方法研究RNF166对T细胞活化的调控作用，研究结果表明，RNF166过表达促使T细胞表面早期活化蛋白CD69实现2倍增量。研究相关结构域的调控作用发现，上游C2H2结构域抑制RNF114正向调控，下游C2H2结构域作用与之相反；RING结构域可以抑制RNF166的正向调控。我们通过采用蔗糖密度梯度超速离心实验，首次明确了ZNF313与其家族成员TRAC-1（膜结合蛋白）不同，为非膜结合蛋白。ZNF313 通过泛素化介导其底物蛋白分子的降解，而实现其对T细胞活化的干预。同时，Pull-down结果证实，RNF166可结合Lys48和Lys63多聚泛素链，提示RNF166可能通过“泛素-蛋白酶体” 途径参与T细胞活化；TAP-LC/MS/MS在Jurkat-T细胞共筛选到23种RNF114相互作用蛋白，UniProt分析表明RNF114可能通过这些蛋白参与通过转录及翻译调控、DNA损伤修复、TCR (T cell receptor)信号通路和线粒体融合等途径参与T细胞活化。