用斑马鱼模型和吗啉代反义寡核苷酸基因Knock-down技术研究Zili新基因在精子发生中的功能

本课题拟以申请人和课题组克隆的斑马鱼新基因Piwil2即Zili(EF186090)新基因，并以已报道序列及初步表达研究的Ziwi进行平行实验，通过体外转录mRNA，显微注射建立Zili、Ziwi过表达的斑马鱼模型，合成特异性针对斑马鱼 Zili、Ziwi 翻译起始位点的吗啉代反义寡核苷酸(M-ODN)，建立基因Knock-down的斑马鱼模型，研究这些基因对胚胎发育、原始生殖细胞产生、精子发生过程的影响；确定与这些靶分子相互作用的上下游或协同作用因子，通过共注射Zili、Ziwi基因和相关基因的M-ODN与mRNA，研究基因间的表达调控关系；确定斑马鱼睾丸组织与Zili、Ziwi结合的小RNA，在体外重组Zili、Ziwi与相关的小RNA分子(piRNA)的复合体，研究其对可能的RNA底物的作用。上述研究将初步阐明Piwil2基因的功能及在胚胎发育、原始生殖细胞的产生及精子发生中的作用。