猪瘟病毒NS2蛋白的致细胞病变作用及其分子机理的研究

本项目基本完成了原计划的研究内容，还增加了一些研究内容。采用RT-PCR方法成功扩增到了猪瘟病毒（CSFV）NS2基因，得到12个亚克隆，开展了NS2 蛋白的亚细胞定位、降解特性、对宿主细胞周期与增殖的影响、对宿主细胞炎症因子表达的调控以及NS2蛋白与宿主细胞相互作用蛋白的筛选等方面的研究。结果表明，NS2蛋白定位于细胞内质网，至少含有2个内部信号肽序列、4个跨膜区；NS2蛋白通过蛋白酶体途径快速降解，这一降解过程可以被特异性的蛋白酶体抑制剂MG132所抑制；NS2蛋白对宿主细胞的增殖活性具有一定的抑制作用，诱导宿主细胞周期阻滞于S期，但并不是通过诱导细胞的凋亡来抑制细胞的增殖；NS2蛋白能够引起宿主细胞内质网应激反应，激活核转录因子NF-кB来诱导血管内皮细胞中白介素8（IL-8）和整合素（integrin）β3的表达上调，并且CSFV NS2蛋白的表达能够对抗蛋白酶体抑制剂MG132对NF-кB的活性和IL-8表达的影响；表达CSFV NS2蛋白的细胞表现出对MG132诱导细胞凋亡作用的抗性；CSFV NS2蛋白能够上调宿主细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。通过酵母双杂交技术筛选到11个与NS2蛋白相互作用的猪脐静脉血管内皮细胞（SUVEC）蛋白，分别为GOPC、HNRNPH1、DNAJA1、ATP6、CSDE1、CNDP2、FANCL、TMED4、DNAJA4、MOAP1和PNMA1，其中，GOPC、TMED4、DNAJA1、DNAJA4和CSDE1参与蛋白从高尔基体到内质网的转运、加工以及应激；FANCL和ATP6参与泛素介导的蛋白水解过程；MOAP1、PNMA1和ATP6参与细胞凋亡通路。这些筛选到的蛋白与NS2蛋白对宿主细胞功能影响密切相关。.综上所述，本项目确定了NS2蛋白的亚细胞定位和降解特性，揭示了该蛋白对细胞周期与细胞增殖的调控机制，明确了CSFV NS2蛋白的表达对趋化因子IL-8、integrin β3、抗凋亡蛋白Bcl-2表达的调节作用与机制。本项目所取得结果为阐明CSFV NS2蛋白在致病中的作用和认识CSFV的分子致病机制提供了一些新的理论资料。